148162. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hepatitis vírustól mentes vérplazmafehérje oldat előállítására

Megjelent: 1961. március 31. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 148.162. SZÁM 30. h. 1-8. OSZTÁLY — ZE-151. ALAPSZÁM SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Eljárás hepatitis vírustól mentes vérplazmafehérje oldat előállítására Országos Vértranszfúziós Szolgálat Központi Kutató Intézet Feltaláló: Zgyerka Sándor, tudományos munkatárs A bejelentés napja: 1959. július 3. Az emberi vérplazmagyártás egyik fő problémája a hepatitis vírustól mentes plazma előállítása. A mai vizsgáló módszerek segítségével azonban a hepatitisben szenvedett véradók kiküszöbölésével ez nem valósítható meg. A transzfúzió utáni hepatitis megbetegedések száma ennek következtében világviszonylatban és országosan is állandóan nő. A vérplazma előállítása ma úgy történik, hogy 10—15 véradó kevert plazmáját dolgozzák fel. Fennáll tehát annak lehetősége, hogy egy vírushordozó véradó megfertőzhet több liter plazmát, így a hepatitis fertőzés veszélye annyival nagyobb minél több véradótól szívták össze a plazmát. Készítenek ún. egyedi plazmát is. Ebben az esetben az egy véradótól származó plazmából csak egy beteg kaphat transzfúziót. A transzfúziós hepatitis veszélye ezzel ugyan csökkenthető, de teljesen mégsem lehet kiküszöbölni. Az ilyen módszerekkel gyártott plazma munkaigényes, nagy technikai felkészültséget kíván. Legbiztosabb módszer a plazma vírusmentesítése. A plazma U. V. sugarakkal történő besugárzása, illetőleg a különböző antiviricid hatás szempontjából kipróbált vegyszerek (F. W. Hartmann és mások) nem váltották be a hozzájuk fűzött reményeket. Eddig, az elmúlt 10 év gyakorlata által igazolt egyetlen megfelelő módszer a hőkezelés. A teljes vérplazma hőkezelése azonban nem vihető keresztül, mert a hőlabilis plazmafehérjék koagulálnak. Ez a módszer csak a plazma albuminfrakciójára, illetőleg a hőlabilis plazmafehérjéktől mentesített plazmafehérje oldatra alkalmazható. Ilyen hőkezelhető plazmafrakciók állíthatók elő az alkoholos eljárással (Cohn-féle és más eljárások), ioncserélő gyantával (Hs. Nitschmann és P. Kistler módszere). Ezek a módszerek is nagy technikai felkészültséget kívánnak és munkaigényesek. Kidolgoztunk egy egyszerű, gyors adszorbciós eljárást. Kísérletileg megállapítottuk, hogy ha hígítatlan vérplazmát kvarcporral, mint adszorbenssel hozunk össze, akkor a vérplazmából a hőlabilis fehérjekomponensek adszorbeálódnak és ezáltal eltávolíthatók. Megállapítottuk azt is, hogy az így kezelt vérplazma mos már hőkezeléssel vírusmentesíthető, anélkül, hogy a hőkezelés során számottevő fehérje kicsapódás jönne létre. A készítmény hepatitis vírustól mentes és így transzfúziós célokra a legalkalmasabb. A plazma pH-ját olyan ásványi-, szerves-, — savakkal vagy — savanyú pufferekkel állítjuk 5,5—6,5 érték közé, amelyek ionjai 0,1 g/l koncentrációban nem toxikusak az emberi szervezet számára. Adszorbens gyanánt kvarcport (célszerűen polisilicátokat, silicagélt vagy pl. kereskedelmi néven aerosilt) alkalmazunk. Az adszorbens aránya 10 g plazmafehér jé 2—10 g. Keverés és centrifugálás után a felülúszó pH-ját olyan ásványi-, szerves-, — lúgokkal vagy — lúgos pufferekkel állítjuk 6,8—7,5 érték közé, melyeknek ionjai 0,1 g/l koncentrációban nem toxikusak az emberi szervezetre. A plazmát ezután az ismert módon, 60 C°-on 10 órán keresztül stabilizátorok (askorbinsav, Na-caprylát) jelenlétében hőkezeljük. A kiinduló citrátos plazma (20 ml Colipk7 stabilizátor + 80 ml vér) fehérjetartalma 5,0—5,5%. Adszorbció után a plazma fehérjetartalma 3,5— 4,0%. (Kjeldahl N-meghatározás alapján). Vizsgálati eredményeink azt mutatják, hogy a globulinoknak kb. 50%-a, a fibrinogen pedig kvantitatíve adszorbeálódott, az albumin viszont kimutatható mennyiségben nem csökkent (Tiselius elektroforézis készülék alapján). A hőkezelés során nagyon kevés pelyhes csapadék jelenik meg. Steril szűrés után azonban az oldat kristálytiszta, nem opaleszkál. A hőkezelt plazmafehérje oldat ismételt transzfúzió során ártalmatlannak és pirogénmentesnek bizonyult. Előnye, hogy hepatitis ' vírustól mentes, a teljes vérplazmával szemben hónapokig oldat alakjában + 5 C°-on vagy szobahőfokon is tárolható. Liofilizálás után pedig évekig tartható el. Előállítása más hőkezelhető plazmafe-