147029. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a Reichstein-féle S-anyag előállítására
4 147.029 hydrogenans (1003 sz. törzs) 20 órai, rázás közben történő inkubációja útján kaptunk. 10 órai fermentáció után, amelyet erélyes keverés és szellőzés köziben, 28 C° hőmérsékleten folytatunk, 5 g 5-pregnén-3^,17a,21-triol-20-on-3,21-diacetát (IV) 150 ml 1 : 1 metanol-aceton elegyben való oldatát adjuk a fermentációs oldathoz. A fermentációt és a szellőzést még 6 óra hosszat folytatjuk; ezalatt óránként ellenőrizzük a reakció menetét, a 240 millimikronon mutatkozó extinkció mérése útján. 5 órai fermentáció után már csak Reichstein-féle S-anyag jelenléte mutatható ki a fermentációs oldatban. Ezután a fermentációs oldatot többször kirázzuk kloroformmal, majd a kloroformos kivonatot megszárítjuk és bepároljuk. A maradékból Reichtein-féle S-anyag kristályosodik ki; ez a termék acetonból átkristályosítva 207—209 C°-on olvad. A termelési hányad 80%. 2. példa: ai reakció. 14 g 5,16/í ,21-trobróm-pregnán-3/ 3 ,17ff-diol-20-on-3-acetátot (la) 47 g vízmentes káliumacetáttal éjszakán át, visszacsepegő hűtő alatt forralunk, majd vízbe öntjük a reakcióelegyet, éterrel kirázzuk és a szokásos módon feldolgozzuk. Az oldat bepárlása során, metanil hozzáadása után 16a", 17a-oxido-5--pregnén-3^,21-diol-3,21-diacetát (Ha) kristályosodik ki, e termék olvadáspontja 173—175 C°. Termelési hányad 85%. bi, b'2, i>4, ci és c2 reakciók. 2,8 g 16«, 17-oxido-5-pregnén-3/?-diol-3,21~diacetátot (Ha) 28 ml jégecetben oldunk, 3,8 ml 30%-os jégecetes HBr-oldatot adunk hozzá, fél óra hosszat szobahőimérsékleten állni hagyjuk, majd vízbe öntjük a reakcióelegyet. Az így kapott nyersterméket 400 ml alkoholban 3 óra hosszat forraljuk 40 g Raney-nikkellel visszacsepegő hűtő alatt. Ezután a nikkelt kiszűrjük és alkohollal mégegyszer kifőzzük. Az egyesített alkoholos oldatokat bepároljuk, vízbe öntjük, éterrel kirázzuk és a szokásos módon feldolgozzuk. Metanolból 5-pregnén-3/',17«,2] -triol-20-on-3,21-diaeetát (IV) kristályosodik ki; a termék olvadáspontja 188 C°. A termelési hányad 85%. A (IV) vegyületet az 1. példában leírt módon alakítjuk át mikrobiológiai úton Reichstein-féle S-anyaggá. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás Reichstein-féle S-anyag előállítására, amelyre jellemző, hogy öjlß/^l-tribrom-pregnan-3,17«~diol-20-on3-acetátot (la) alkáliacetáttal való kezelés útján, önmagában ismert módon 18«, 17«-oxido-5-pregnén-3/:í ,21-diol-20-on-3,21-diacetáttá (Ha) és/vagy 5,16^-diklór-21-bróm-preg'nén-3^,17a:-diol-20-on-3-acetátot (Ib) ugyanilyen módon 16«,-17ff-oxido-5-klór-3,21-diol-20-on-3,21-diacetáttá , (IIb) alakítunk át, az így kapott (Ha és/vagy IIb) vegyületeket halogénhidrogénsavval, majd redukálószerekkel való kezelés útján, ismert módon 5-pregnén-3/?,17tt,21-triol-20-on-3,21-diacetáttá (IV) alakítjuk, ezt a diacetátot pedig Flavobacterium dehydrogenans mikroorganizmussal vagy e mikroorganizmusból előállítható enzimmel, önmagában ismert módon biológiai kezelésnek vetjük alá, majd az így kapott Reichstein-féle S-anyagot (V) önmagában ismert módon elkülönítjük a reakcióelegyből. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy az 5-pregnén-3^,17«,21-triol-20-on-3,21-diacetátot előbb kémiai szerekkel, előnyösen alkálihidrogénkarbonáttal részlegesen elszappanosítjuk a 21-helyzetben, majd Flavobacterium dehydrogenans mikroorganizmussal, vagy e mikroorganizmusból előállítható enzimmel kezeljük és az ily módon előállított Reichstein-féle: S-anyagot elkülönítjük a reakcióelegyből. A Kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 60730. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.
