146875. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroidok mikrobiológiai oxidálására
2 146.875 !l-alía-Oxi progeszteron tartalom tartalom 40 mg 0 28 mg 0 17,5 mg 0 14 mg 0 9 mg 0 0 mg 0 6,5 rag 43 mg lével pótoljuk, a 16. órában pedig a kísérlettel leálltunk. A táplevet 2-szeres térfogatú diklóretánnal ráztuk ki, az oszlopban maradó micéliuimot pedig 2-szier 10 ml acetonnal, majd 100 ml kloroformmal három részletben extraháltuk. Az egyesített extraktuimokat 2%-os nátriumbikarbonáttal, majd vízzel mosva és nátriumszulfáttal szárítva kvantitatív papírkromatográfiával vizsgáltuk. Eredmények: Mintavétel időpontja 6. óra 8. óra 10. óra 12. óra 14. óra 16. óra (leállás) micéliuimról összesen 115 mg 11-oxiprogeszteron Visszanyert szteroid összesen: 158 mg. Átalakítás tehát 72%-os a bemért progeszteronra számítva. 2. példa: Azonos fermentációs, oxidációs és feldolgozási feltételek mellett mint az 1. példában állítottuk be a kísérletet, de a minta vételekor az elvett 250 mil felülúszót mindig 250 ml desztillált vízzel pótoltuk. Légsabesség 3 Irt/perc, folyadékáramlási sebessége 240 ml/perc. Eredmények: Mintavétel időpontja 4. óra 6. óra 8. óra 10. óra 12. óra 14. óra 16. óra micéliuimból összesen ll-alfa-oxi progeszteron tartalom tartalom 10 mg 0 16 mg 0 35,5 mg, 0 43 mg 0 20,5 mg 0 15,5 mg 0 7,5 mg 0 0 mg 14 mg 148 mg Visszanyert szteroid összesen: 162 mg. Átalakítás tehát 90%-os a bemért progeszteronra számítva. 3. példa: Azonos fermentációs, oxidációs és feldolgozási feltételek mellett mint az első példában, de a 6., 8. és 10. órás mintavételkor a frissen beadagolt 250—250 ml fermentlé 40—40 mg progeszteront tartalmazott, így az oszlopra rávitt össz-szteroid mennyiség 280 mg volt. Áramlási sebesség 250 ml/pere, légsebesség 3 lit/perc. Eredményék: Mintavétel időpontja 11-aífa-oxi tartalom progeszteron tártalom 6. óra 58,8 mag 0 8. óra 51 mg 0 10. óra 35,6 mg ; 0 12. óra 33,8 mg ; 0 14. óra 30 mg 0 16. óra 21,8 mg 0 18. óra 9,7 mg 0 20. óra (leállás) 3,7 mg 0 micéliuimból 0 mg 38 mg összesen r 244,4 mg Visszanyert szteroid összesen 282,4 mg. Átalakítás tehát 8/6%-os a bemért progeszteronra számítva. 4. példa: 5 liter 1. példában leírt táptalajt oltottunk be 6-szor 104 Cunninghamella blakesleeana spórával üvegferimentorban. A tenyészetet két napig 28°-on kevertettük és levegőztettük. A pellet alakban nőtt tenyészetibcfl 400 iml-t oszlopba tettünk és 100 mg Reichstein-féie S-vegyületet adagoltunk hozzá. A 4., 8., 12., 16. és 20. órában 200 ml felülúszót 200 ml friss fermentlével cseréltünk ki. A levett fermentleveket extraháltuk és papírkroimatográfia szerint jó termeléssel keletkezett hidrokorjizon, valamint kimutatható volt kortizon és ennél polárosabb anyag. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás szteroidok oxidálására micéliumképző mikroorganizmusokkal folyadékban, melyre jellemző, hogy a rögzített mikroorganizmus tömegen az átalakítandó szteroidot tartalmazó, oxigénnel telített vizes oldatot áramoltatjuk át, így az átalakítandó vegyületet megkötjük a imicéMumtömegen, és a keringő lé szakaszos elvezetésével, a vizes oldatból a hasznos terméket kinyerjük. 2. Az; 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy az oxidáláshoz pellet (gyöngy) alakban tenyésztett mikroorganizmus ágyat használunk és a mikroorganizmusokat a folyadékáraimmai szemben szűrőfelülettel tartjuk vissza. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli ^módja, melyre jellemző, hogy a mikroorganizmusokon előbb szteroidtartalmú táptalajt áramoltatunk át, majd a folyadékáramból az, oxidált szteroid kinyerése céljából elvezetett táptalaj*t szteroidtartalmú vagy szteroidmentes táptalajjal pótoljuk. 4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy a folyadékáramból az oxidált szteroid kinyerésére elvezetett folyadékot vízzel vagy szteroidtartalmú vízzel pótoljuk. 1 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 60715. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-2S.
