146852. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mezőgazdasági készítmények különösen takarmányszerek előállítására fermentálás útján

2 146.852 A találmány egy másik foganatosítási módja abban van, hogy alacsony (mintegy 0,25—0,5%-os) glukóztartalmú tápoldatot állítunk elő, mely elegendő az S. olivaceus szaporodására. 30 órai fermentálás után, midőn ennek a törzsnek fejlődése elvileg befejeződött, a tápoldathoz szaharózt vagy más olyan tápanyagokat (pl. ammóniumszulfátot) adagolunk, melyek az S. aureofaciens szaporodását segítik elő. Ilyen módon az antibiotikum előnyös egyensúlya áll be. Kezdetben olyan klórtetraciklin-szintet tartunk fenn, mely fertőzések meggátlására elegendő, azonban az S. olivaceus növekedését még nem zavarhatja. A teljes klórtetraciklin-termelést csak egy későbbi fázisban érjük el, midőn az S. olivaceus már nagymértékben kifejlődött és azt az antibiotikum már nem veszélyeztetheti. Az S aureofaciens szaporodását és termelékenységét ebben a fázisban igen előnyösen befolyásolja, hogy nitrogénforrásként kihasználhatja az S. olivaceus mioéliumának lebontási termékeit, minthogy ez ebben a fázisban már autolizálni kezd. A találmány szerinti eljárás azonban nincs a felsorolt antibiotikumokat termelő törzsek felhasználására korlátozva. Más törzsek is alkalmazhatók, melyek a mezőgazdaságban hasznosíthtó antibiotikumokat termelnek, pl. streptomicint és más efféléket, mint az az alanti példákból kitűnik. Az ilyen mezőgazdasági készítményeknek a találmány szerinti előállítása igen egyszerű és olcsó, mert a biológiai hatóanyagok mindenkor (vagy a micéliumiban vagy a kiérj edt tápoldatban) oldhatatlan sók alakjában vannak jelen. Ennek folytán lehetővé válik az igen hatásos kombinált mezőgazdasági készítmények, különösen takarmányszerek a fermentált elegyből csupán szűrés, szárítás és porítás útján való gyártása. Az alanti példák a találmány különböző foganatosítási módjait, melyek szerint mezőgazdasági készítmények fermentálás útján való újszerű előállítása megvalósítható, példaképpen ismertetik. A felsorolt példák a találmányt nem korlátozzák, minthogy annak keretén belül még számos más változat is megvalósítható. 1. példa: 50 liter következő összetételű tápoldatot készítünk : glukóz 0,25% szaharóz 2,5 % szójaliszt 2,0 % CaC03 0,6 % NaCl 0,25% Ammóniumszulfát 0,3 % Melasz 0,2 % Kukoricalekvár 0,5 % C0CI9 0,05% pH 6,9 A tápoldatot hűtő- és fűtőkígyóval, szellőzte tőkoszorúval és kavaróval felszerelt fakádban 10 percig forraljuk. 28 C°-ra való lehűtés után a tápoldatot beoltjuk 2%, az S. olivaceus 30 órás vegetatív tenyészetével, mely tenyészetet a következő összetételű tápoldaton készítettük: glukóz 2 % kukoricalekvár 1 % ammóniumszulfát 0,2 % CaC03

0,4 % C0CI2 0,05% továbbá 3%, az S. aureofaciens Bgio—3 törzs 36 órás vegetatív tenyészetével. Ezt az utóbbi tenyészetet viszont a következő táptalajon készítettük : szaharóz 3 % szójaliszt 2 % CaCOs 0,5 % NaCl 0,35% ammóniumszulfát 0,2 % kukoricalekvár B 54 0,6 % Az S. aureofaciens — inokulum 250 gamma/ml klórtetraciklint tartalmazott. A fermentálást 28 C°-on kavarás (percenként 300 fordulatszám) és szellőztetés (percenként 0,3—0,5 térfogat levegő) közben folytattuk le. 60 órai tenyésztés után a termelés 810 gamma/ml klórtetraciklin és 1,8 gamma/ml Bj 2

lvitamin volt. A klórtetraciklint kolorlmetriás úton, Levine, Garlock és Fischbach szerint határoztuk meg, a B12~vitamint viszont mikrobiológiai úton, L. Leichmanii 313 segélyével. A táptalajt szűrősajtón szűrtük és a folyadéktól megszabadított micéliumot, mely gyakorlatilag az összes klórtetraciklint, valamint a Bi2-vitamint tartalmazza, vakuum-dobszárítószekrényben 80 C°-on 2 óra hosszat szárítottuk. A készterméket porítottuk. Termelés: 2 kg készítmény, mely kg-ként 20 g klórtetraciklint ós 35 mg Bi2-vitamint tartalmazott. 2. példa: 50 liter következő összetételű tápoldatot készítettünk: glukóz 0,25% szójaliszt 2 % CaC03 0,5 % ammóniumszulfát 0,25%, NaCl 0,25% melasz 0,2 % kukoricalekvár 1374 0,7 % CoCl2 0,05% A tápoldatot $z 1. példa szerint, fakádban 10 percig forraltuk,: majd 28 C°-ra lehűtöttük és beoltottuk 3%, az S. olivaceus törzs 30 órás vegetatív inokulumával, melyet az 1. példában ismertetett módon készítettünk elő, továbbá 4%, az S. aureofaciens Bg 16—3 törzs 36 órás vegetatív inokulumával. Az utóbbi inokulurnot ugyancsak az 1. példában ismertetett módon készítettük elő. A tenyésztést 28 C°-on kavarás (percenként 300 fordulatszám) és szellőztetés (0,3—0,5 térfogat levegő percenként) közben folytattuk le. 30 órai fermentálás után a glukóztartalom. 0,06%-ra csökkent. Ekkor hozzáadtunk a táptalajhoz 1,25 kg (2,5%) szaharózt, melyét előzetesen 10 liter vízben felforraltunk. 72 órai fermentálás után a táptalaj koncentrációja 790 gamma/ml klórtetraciklin és 2,4 gamma/ml Bi2-vitamin volt. A tápöldatot Dorr—Olivér-rendszerű forgó dobszűrőn, melyet szűrő segédanyagként burgonya-