146687. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 vitamin tartalmú fermentátum előállítására Rhizobium melilotti törzs variánsával
2 146.687 A táptalaj mintegy 0,21 gramm % nitrogéntartalmú, mely érték az esetenként felhasznált élesztőkivonat és kazein hidrolizátum nitrogéntartalmától függően bizonyos mértékben változhat. 24 órás ferde lucernás agártenyészetről, amelyet 5 ml fiziológiás vízzel mostunk le, 1 ml-rel, 100 ml inokulum táptalajt oltottunk 26 C°-on 24 óráig tenyésztve, ennek 2%-ával oltjuk a fermentorban levő táptalajt, melynek összetétele: KH2 po 4 8,08 g KOH 1,28 g MgS04 7H 2 ö 5,0 g KCl 2,0 g FeS04 7H 2 0 0,2 g CoCl2 6H 2 0 0,12 g Krumplicukor 20,0 g kukoricalekvár száraz anyag 24,0 g sörélesztő kiv. 300 mg N-tartalommal. Csapvízzel 1 literre feltöltve pH= =6,8 A fermentoron 0,5 liter levegőt fúvatunk át percenként a táptalaj minden literére számítva. A fermentálást 26 és 27 C° közötti hőmérsékleten végezzük. A 32 órában értük el a B12 vitamin csúcsértékét, mely milliliterenként 5",3 gamma volt. (E coli test-tel mérve.) 2. példa. Összehasonlító kísérleteket végeztünk rázott tenyészetben használt Rhizobium meliloti „A", „B" és ,,C" variánsaival. A B12 vitamin csúcsértékeit ugyanazon a táptalajon mint az 1. példában a 39-ik órában értük el. Az „A" variánssal 10,0 gamma/ml. a ,,B" variánssal 8 gamma/ml, a ,,C" variánssal 2,50 gamma/ml értékeket kaptunk. 3. példa. Egy más kitenyésztésű, nem nyákos Rhizobium meliloti törzset az 1. példa szerinti táptalajban fermentálva, 3% cukortartalom mellett adta a legjobb Bj2 vitaminhozamot; míg egy további kitenyésztésű törzs 2% cukortartalom mellett adta Bi2 csúcsértéket. 4. példa. A táptalaj nitrogéntartalmát néhány előkísérlettel az optimális értékre állíthatjuk be. így például az 1. példa szerinti táptalajt használva a nitrogén mennyiséget kazein hidrolizátum adalékokkal a következő értékekre beállítva a következő eredményeket kaptuk: Kazein g%: 0,5 B 12 gamma/ml 3,10 f J 1? j) ÍJ 1,0 1,5 2,0 2,5 6,05 8,70 10,32 10,0 Kazein helyett nitrogénforrásként kukoricalekvárt és sörélesztő hidrolizátumot használva, rázott tenyészetekben a következő értékeket kaptuk: Kukoricalekvár száraz anyag %: 1,0 1,40 2,40 3,4 B12 gamma/ml 3,5 4,7 8,8 7,3 1. példa szerinti másik kísérletben, amelynél a 3% cukrot a táptalajjal együtt sterileztük, rázott kísérlet során 4,87 gamma/ml Bj2 vitamint kaptunk. Ha a táptalajt és a cukrot külön sterileztük és utólag öntöttük össze a termelt B[2 vitamin mennyisége egyébként azonos feltételek mellett 2,82 gamma/ml volt. A rázott lombikokat általában 20 percig az 5 liter hasznos űrtartalmú fermentorokat 30 percig sterileztük 120 C°-on. A baktérium fejlődés a 8—12 órában már kifejezett volt. Ha a fermentorokat pl. hosszabb ideig sterileztük, úgy a baktériumfejlődés csak a 28—30. órában indult meg és így az egész fermentáció időtartama is ennek megfelelően meghosszabbodott. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás Bi2 -vitamin tartalmú fermentátum előállítására Rhizobium meliloti törzs variánsával, melyre jellemző, hogy a fermentáláshoz a törzsnek ,,S" csoportba tartozó csökkent nyákkápző, előzetesen szelektált „A" vagy ,,B" variánsát, asszimilálható, célszerűen 0,1—0,4% nitrogént, célszerűen 1,0—3,5% szénhidrogént és szervetlen sókat tartalmazó táptalajban levegőztetéssel és, célszerűen 26—27 C° hőmérsékleten szaporítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a tenyészet minden literére számítva percenkint 0,5 liternél kevesebb, előnyösen 0,1—0,3 liter levegőt fúvatunk át. ./ 3. Az 1. vagy 2. igénypontok szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a táptalajban asszimilálható nitrogénforrásként kukoricalekvárt használunk. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a szénhidrátként alkalmazott cukrot a táptalaj többi alkatrészeivel együtt sterilezzük. A kiadásért feiel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgató)« 60376. Terv Nyomda, Budapest V„ Balassi Bálint utca 21-23.
