146495. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikum előállítására
146.495 3 Gátló koncentráció y/ml ül. Dermatophytonok Toxicitás egéren: a) Subcutan vizes suspenzióban 250 mg/kg se akut, se kései tüneteket nem okozott. b) Per as. vizes suspenzióban, gyomorszondán bevíve 250 mg/kg mennyiségben se akut, se kései tüneteket nem okozott. c) Intraperitonealisan vizes suspenzióban LD50 25 img/kg. Therápiás kísérlet: A Candida albicans-sal táplált — egyidejű terramicin adás mellett — egerek székletéből a kontrollokhoz viszonyítva kétszer 100 mg/kg per. os. adott flavofungin a candidal vagy teljesen kiirtja, vagy a telepek számát néhányra redukálja. A Streptomyces SA—IX, illetve célszerűen Streptomyces SA—IX—3 törzset a flavofungin termelése céljából célszerűen felszín alatti, kevert és levegőztetett kultúrában tenyésztjük, 'asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást, továbbá a mikroorganizmusok fejlődéséhez szükséges ásványi sókat tartalmazó organikus táptalajon. A fermentáció céljára szolgáló inokulum elkészítése és a fermentáció lefolytatása a találmány értelmében célszerűen a következőképpen történhet: A fermentációhoz felhasználásra kerülő törzset nitrogénforrást, célszerűen aszparagint tartalmazó szilárd táptalajon szaporítjuk, majd erről előinokulum készítése végett ugyancsak asparagin tartalmú folyékony organikus táptalajra visszük át. Ez a folyékony táptalaj célszerűen élesztőfőzetből áll, melyhez az asparaginon kívül nitrátot, foszfátot, továbbá MgSC>4-ot és KCl-ot is adunk. Ebben a táptalajban a törzs rázott tenyészetben 27 C°-on 3—4 nap alatt kellően elszaporodik; a tenyészet színe élénk zöldessárga lesz. Az így kapott előinokulumot ezután a végleges inokulum elkészítése végett olyan folyékony táptalajba visszük át, amely nitrogén-forrásként pl. peptont, szénhidrát-forrásként cukrot vagy cukoralkoholt, vA. glicerint, továbbá szervetlen sókat tartalmaz. Ebben a táptalajban 27 C°-on, levegőztetéses keverés mellett 36—48 óra alatt sűrű halványsárga színű micélium-töimeg képződik. Ebből az inokulumból a végleges (termelő) fermentáció lefolytatása végett valamely nitrogén- és szénhidrátforrást tartalmazó komplex szerves, vagy szintetikus táptalajba, e táptalajmennyiség 5—10%-ának megfelelő mennyiséget oltunk át. A fermentációt célszerűen 27 C° hőmérsékleten, levegőztetés és keverés mellett folytatjuk le. 48 óra múlva már az egész fermentációs lé megsárgulása mutatja, hogy a hatóanyag termelése 'megindult. A fermentációt 80—90 óra hosszat folytatjuk. A hatóanyagtermelést biológiai úton (Candida albicans), az ibolyántúli színkép alapján, vagy közvetlen preparatív úton ellenőrizhetjük. Megjegyezni kívánjuk, hogy mind a hőfokok, mind a tenyésztési idők, melyeket -megadtunk, általában az optimális körülményeket jelzik, melyektől természetszerűleg — mint általában biológiai folyamatoktól — eltérések lehetségesek. A fermentáció folyamán — amennyiben nagyobb mérvű habzás mutatkozik — habzásgátló szert, pl. valamely növényi olajat, adhatunk a fermentációs léhez. A fermentáció befejezése után — amennyiben a fermentációs lé számottevő mennyiségű habzásgátló szert tartalmaz — valamely klórozott szénhidrogént, pl. kloroformot adunk a fermentációs léhez a habzásgátló szer feloldása végett, azután leszűrjük a fermentációs levet. A termelt hatóanyag a micéliummal együtt a szűrőn marad. Ha a fermentációs lé habzásgátló szert egyáltalán nem, vagy csak elhanyagolható mennyiségben tartalmaz, úgy nincs szükség szerves oldószer hozzáadására, a fermentlé rögtön leszűrhető. A szűrőn maradt nedves mieélium tömeget forró észterekkel, célszerűen etilacetáttal extraháljuk. A hatóanyag oldatba megy és az oldószer bepárlásakor igen tiszta állapotban kristályosan kiválik. A hatóanyag leszűrése és szárítása után kapott kristályos termék az eddigi vizsgálatok alapján kb. a következő összetételű: C = 58,39% H= 8,40% 0 = 33,21% Az anyag sárga színű, tömény sósavban és tömény kénsavban vörös színnel oldódik. Jól oldható jégecetben, piridinben, dimetilfórmamidban, meglehetősen oldódik kisebb molekulasúlyú alkoholokban, etilacetátban és egyéb észterekben, rosszul oldódik vízben, kloroformban. Éterben, petroléterben, széndiszulfidban, hexánban és benzolban gyakorlatilag oldhatatlan. Etilalkoholos oldatának ibolyántúli abszorpciós maximumai: 263 és 368 m/x, plató 233 m/x-nál. Az anyag káliumpermanganátot és brómot fogyaszt, katalitikusan hidrogénezhető. Hidrogénezós esetén színét és biológiai aktivitását elveszti. Acetilezhető és brómozható. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját az alábbi példák szemléltetik: 1. példa: a) Előinokulum készítése 50 ml élesztőfőzethez 1 g NaN03 -ot, 0,5 g aszparagint, 2,5 g Na2 HPO 4 -0t, 0,25 g KH 2 P0 4 -ot, Trichophyton mentagrophytes 20 Trichophyton tonsurans 30 T. rubrum (2 törzs) 10 T. gypseum (2 törzs) 20 T. purpureum 10 alatt T. cerebriphorme 10 alatt T. sulphureum 10 alatt Epidermophyton K.-W- (2 törzs) 20 Epidermophyton K.-W- (2 törzs) 15 E. inguinale 10 Microsporum canis ' 10 alatt M. gypseum (emberből) 10 alatt M. gypseum (talajból) 50 Achorion Quinkeanum 10 alatt Keratinomy ces 10 alatt Histoplasma capsulatum 10 Sporotrichum schenkii 10 Nocardia asteroides 20 Hormodendrum compactum 10 alatt
