146469. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 vitamint és rokonvegyületeit tartalmazó fermentációs termékek feltárására

146.469 3 A 2. táblázatban bemutatott kísérlet kiindulási anyaga 15 1 methanobaktériumos fermentáció Al2(SC>4)3 hozzáadásával koaguláltatott üledéke, amit centrifugálással tömörítettünk és utána vízzel 3,5 kg súlyra kiegészítve, alaposan homogenizáltunk, miközben az elegyet híg sósav hozzáadásával pH 5,5-re savanyítottuk. Az így nyert kiindulási anyagot 7, egyenként 500 g^os részre osztva, hozzátadtUik a táblázat szerinti reagenseket és nyílt lángon felmelegítve 5 percig forraltuk. Lehűlés után centrifugálással leválasztottuk a szupernatanst, majd az üledéket 200 ml vízben félszuszpendálva még egyszer felforraltuk.. Ennek a második kivonatolásnak a levét egyesítettük az első kivonattal és az első kísérletsorozattal azonos módon feldolgoztuk B12 vitamin tartalomra. Az utolsó négy kísérlet feldolgozásából nyert vizes koncentrátumot kromatografálás előtt szárazra pároltuk és a súlyát lemértük. (2. táblázat.) II. sz. Táblázat Reagens 0,4 g ditionit 0,4 g CrOs 0,3 g ditionit 0,3 g Cr03 0,2 g ditionit 0,2 g Cr03 0,1 g -ditionit 0,1 g Cr03 0,1 g NaCN Kinyert B12 vitamin 126 gamma 186 gamma 180 gamma 202 gamma 192 gamma 170 gamma 200 gamma Kitermelés a CN-hez viszonyítva 63% 93% 90% 101% 96% 84% - 100% A sűrítmény / szárazanyagtartalma — — \ 6,9 mg 9,8 mg 10,2 mg 14 mg Látható, hogy a dithionit és CrQ3

együttes alkalmazásával nemcsak 100%-os feltárást lehet elérni, hanem a nyert termék szennyeződése is lényegesen kevesebb, mint a CN' mellett végzett feltárás esetén és fokozatosan csökken a feltáró reagens mennyiségének emelésével. Az alábbi példából látható az eljárás üzemszerű alkalmazásának imódja és a vele elérhető technológiai előny. ami 3 m3

methanobakté-1. példa: 1 ím3

üledéket riumos ermentlé Alnszulfátos koaguláltatásából származik, pH 5,2 mellett, közvetlen gőz bevezetése közben 300 g dithionit és 300 g Cr03 hozzáadása után felforralunk. Az elegyet táskás .szűrőprésen, 3 atü présnyomás alkalmazásával leszűrjük. A szűrés 11 percig tart. Szilárd össze^ álló préskalács marad vissza, amit 300 1 vízben felszuszpendálunk és felforralás után ismét leszűrünk. Nyerünk összesen 1450 liter szűpletet, melynek 1 1-éből az 1. sz. kísérletbén leírt preparatív eljárással tisztítva, kimérhető 201 gamma B12 vitamin. A szűrlet az ismert módon, pl. fullerföldes adszorpcióval tovább tisztítható és feldolgozva 0,32 g kristályos B12 vitamint eredményez. (Ugyanebből a. kiindulási anyagból lm3

— azonos módon —, de 300 g NaCN hozzáadásával, CN elszivató szellőztető berendezés működtetése közben feltárva 1370 1 szűrletet eredményezett, az első szűrés ideje 26 perc volt és a présmaradék pépszerűen folyós maradt. Az 1 1-ből kipreparálható B12 vitamin tartatom 193 gammának adódik. A nyeredék tehát a hibahatáron belül azonos, de a feltárt anyag lényegesen nehezebben szűrhető1

.) 2. példa: Az ismertetett feltárási módszert jól alkalmazhatjuk más fermentációk B12 vitamin tartalmának a kinyerésére is. így 1000 1 Propionbact.shermanii-val végzett fermentáció termékét lúggal pH 8-ra állítva, 50 1 10%-os FeCI3

oldattal koaguláltatjuk és ülepedés után a szupernatanst leszívatjuk. A visszamaradó kb. 280 1 üledéket, ami az összes hatóanyagot tartalmazza, direkt gőzzel forrásig melegítjük és közben hozzáadunk 150 g Na-dihionitot, majd 150 g krómsavanhydridet. A forró anyagot leszűrjük, a csapadékot 150 1 vízben felszuszpendálva felforraljuk és ismét leszűrjük. Az egyesített szűrlet (450 1) egy mintájából az előzőkben leírt módon kipreparáljuk és kromatográf iával elválasztjuk a Bi2

vitamint. Azt találjuk, hogy a szűrlet hatóanyag tartalma literenként 3,01 mg. A kromatografálás előtti koncentrátum szárazanyag-tartalma 174 mg volt. Ugyanezen fermentléből származó 1000 1 mennyiséget hasonló módon, de 300 g Nadithionit és 300 g krómsavanhidrid hozzáadásával feldolgozva, 470 1 szűrletet nyerünk, melyből literenként 3020 gamma Bi2

vitamint tudunk kipreparálni. A megfelelő koncentrátum szárazanyag-tartalma 139,2 mg. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás B12 vitamint tartalmazó fermentációs termékek feltárására, azzal jellemezve, hogy a feltárást két vegyértékű ként tartalmazó vegyületek és/vagy hatértékű krómot tartalmazó vegyületek jelenlétében végrehajtott hőkezeléssel végezzük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy feltáró reagens-