146282. lajstromszámú szabadalom • Eljárás száraz szilárd állapotú bakteriofag készítmények előállítására

2 146.282 időtartama minden egyes baktériumfajta esetében különböző és az illető baktériumfajtára jellemző, egyebekben azonban a kultúratenyésztés lefolytatása alkalmazkodhat az adott technológiai feltételekhez. Az elszaporított baktériumszuszpenzióhoz azután hozzákeverjük a specifikus bakteriofágot, a bakteriofág-készítmény titerének megfelelő mennyiségben. Az ennek hatására bekövetkező litikus folyamat hasonló feltételek között folyik le, mint előzőleg a baktériumok szaporítása. A litikus folyamat befejeződése az elegyben jelenlevő mikroorganizmusok számának csökkenésével és a táptalaj kitisztulásával jár együtt; a táptalajt inaktiválás és szűrés után valamely erre alkalmas szervetlen só, pl. ammóniumszulfát hozzáadásával koncentráljuk. Ezt a koncentrátumot azután szobahőmérsékleten vákuum alatt beszárítjuk. A megszárított elegyet a gyakorlati követelményeknek megfelelő gyógyszerkiszerelési alakba hozzuk, pl. töltőanyagok hozzáadásával tablettázzuk, és a tablettákat savaknak ellenálló réteggel vonjuk be. Eljárhatunk oly módon is, hogy a megszárított elegyet savakkal szemben ellenálló kapszulákba töltjük. Esetleges parenteriális alkalmazás céljaira szolgáló készítményt oly módon állíthatunk elő, hogy a koncentrált elegyet dialízis útján sómentesítjük, majd liofilizálás útján hozzuk szilárd alakba. A találmány szerinti eljárással előállított száraz szilárd bakteriofág-készítmények nagyfokú specifikus és azonnali hatást mutatnak a szervezetben, nem váltanak ki kellemetlen klinikai mellékhatásokat, nem pusztítják el a hasznos bélflórát, és nem idézik elő rezisztens baktériumtörzsek kifejlődését. E készítmények hosszú ideig megtartják biológiai hatásosságukat. A kezelt beteg szempontjából nagy előnyt jelent a készítmény egyszerű és kényelmes beadási és adagolási módja, amely nem igényel szigorú orvosi felügyeletet a kezelés folyamán. A megszárított bakteriofág-készítmények bármikor felhasználhatók további tenyészetekben bakteriofág-termelésre. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját az alábbi példa szemlélteti. Példa: Sonne-típusú dysenteria-bakteriofág előállítása. A tenyésztőberendezés tartályába 8000 ml steril táptalajt (pH = 7,6) viszünk be, és ehhez a Sonneféle dysenteria-baktérium olyan szuszpenzióját keverjük 350—400 ml mennyiségben, amelyet nyugalmi állapotban tartott folyékony táptalajon tenyésztettünk ki, 37 C° hőmérsékleten lefolytatott 5 órai inkubáció útján. A tartályban a baktériumtörzs elszaporítását 37 C° hőmérsékleten, keverés és szellőzés közben végezzük. Az inokulálás után 90—120 perccel ellenőrző mintákat veszünk az elegyből. Meghatározzuk e minták pH-értékét, és szükség esetén a pH-értéket 7,6-ra igazítjuk ki. 3 órai tenyésztés után, amikor az elért mikroorganizmus-szám kb. 2,5 milliárd/ml, 400—500 ml olyan specifikus Sonne-típusú dysenteria-bakterio-A kiadásért felel: a Közgazdasági fágot adunk az elegyhez, amelyet folyékony táptalajon állítottunk elő, Sonne-baktériumtörzs sztatikus vagy alámerített állapotban történő fagolízise útján. A tenyésztő tartály ban lefolyó fagolízis menetét két órai időközökben ellenőrizzük. A fagolízis befejezését egyrészt a táptalaj szemmel látható kitisztulása, másrészt a miililiterenkénti mikroorganizmus^szám csökkenése, továbbá a' millfliterenkénti nitrogéntartalom biokémiai megfigyelése mutatja. A folyamat befejezte után a bakteriofág-kultúrát aszeptikus körülmények között kieresztjük a tartályból, vízfürdőn 56 C° hőmérsékleten inaktiváljuk, majd Seitz-szűrőn szűrjük. A natív bakteriofág hatásosságát a szabványos vizsgálati módszerrel ellenőrizhetjük. Ezután a táptalaj-elegyet koncentráljuk és tisztítjuk. A koncentrátumot 0 C° hőmérsékleten hűtjük, majd szilárd ammóniumszulfidnak a teljes telítettségig való hozzáadása útján kicsapjuk, a pH-értéket 4 mólos sósavoldattal 6,9-re állítjuk be, és az egész elegyet éjszakán át 4 C° hőmérsékleten hagyjuk állni a hűtőhelyiségben. A képződött csapadékot azután a még mindig alacsony hőmérsékleten tartott elegyből centrifugálás vagy szűrés útján elkülönítjük. A csapadékhoz nedves súlya 10%-nak megfelelő mennyiségű kalciumglükonátot adunk, majd az elegyet szobahőmérsékleten vákuum alatt megszárítjuk. A kapott száraz tömeget töltőanyagok hozzáadásával tablettázzuk, és savakkal szemben ellenálló bevonattal látjuk el a tablettákat, vagy pedig savnak ellenálló kapszulákba töltjük a száraz maradékot. A bakteriofág optimális tablettánkénti mennyiségét minden egyes gyártási adagban meg kell határozni titrálás útján. A bakteriofág tablettánkénti mennyisége alapján lehet azután az alkalmazási adagot megszabni. A fenti példához hasonló módon tenyészthetők ki és dolgozhatók fel az egyéb mikroorganizmusfajták, mint pl. dysenteria-, typhus-, paratyphus-és egyéb Salmonella-fajú baktériumok, Vibrio cholerae, Escherichia coli, coli 111 B4, 55 B5 és 26 B6, Staphylococcusok, Proteus és hasonlók specifikus bakteriofágjai is. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás száraz, szilárd állapotú bakteriofágkészítmények előállítására, melyre jellemző, hogy a bakteriofágokat hidrolizátum-táptalajban, amely a megfelelő mikroorganizmusokat is tartalmazza, alámerülő kultúrában kitenyésztjük, a kultúrát enyhe melegítés és bakteriológiai szűrőn való szűrés útján inaktiváljuk, a bakteriofágot anorganikus só, előnyösen ammóniumszulfát segítségével kicsapjuk, a csapadékot elkülönítjük és megszárítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy a bakteriofág lecsapását alacsony hőmérsékleten, előnyösen 0 C° közelében végezzük. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy az elkülönített bakteriofág-csapadékhoz, annak végső feldolgozása előtt kalciumglükonátot adunk. és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 594587. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.