145921. lajstromszámú szabadalom • Eljárás delta 1,4-androsztadiéndionnak fermentációs közegből történő meghatározására az optimális termelési szint időpontjának megállapítására
2 145.921 dionon kívül keletkezett, valamint az esetleges túloxidált termék (progeszteron, zl4 -androszténdion, zl 4 -dehidro-tesztololakton) zavaró hatása a kidolgozott módszerünkben elhanyagolhatóan kicsi. Tehát egy adott hullámhosszon, ül. hullámhossz tartományban történő egyszerű méréssel az androsztadiéndion koncentráció meghatározható. Tekintettel arra, hogy a kiindulási progeszteron koncentrációja, a bemérés súlya és a fermentációs folyadék térfogata által meghatározott érték, az elméleti androsztadiéndion koncentráció kiszámítható. A biológiai oxidációs folyamat leállítása így az elméletileg számított érték közvetlen közelében a módszer alkalmazása alapján eszközölhető és a termelés gazdaságossá tehető. Módszerünkben szereplő reagensek adalékanyagot vagy anyagokat tartalmazó megfelelő töménységű vizes kénsavas oldatok. Ilyen — az androsztadiéndionra szelektív színreakciót létesítő — reagensként igen jól bevált az elemi jód, fenolos vassók együttes alkalmazása, továbbá merkuri sók, mely reagenseket kénsavas közegben, előnyösen mintegy 70%-os kénsavban alkalmazunk. Ezekkel az anyagokkal a színreakciót rövid idő alatt, pl. 10 percig 100 C°-ra történő hevítéssel megkapjuk, s e színes terméknek, pl. fotometriás mérés segítségével az androsztadiéndion koncentrációt a mintavételtől számított mintegy 25 perc alatt meghatározhatjuk. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi példákat adjuk meg: 1. példa: Eredetileg 200 y/ml progeszteront tartalmazó fermentátumból — mely 181 y/ml diéndionnal ekvivalens — megfelelő időközökben (fermentáció előrehaladtával kb. félóránként) homogénen vett minta 2 ml-ét kb. 12 ml-es centrifuga csőben 8 ml CCl4-dal kirázzuk. Centrifugálás és a kiextrahált fermentátumnak vákuumszívással történő eltávolítása után a szerves fázisból 4 ml-t vízfürdőn bepárolunk. A száraz-maradékot 1 ml alkoholban oldjuk. Hozzáadunk 10 ml jód-kénsavas reagenst (1 lit. 24 n kénsavban 0,0005 mol jód oldva) és a kapott oldatot 10 percig 100 C°-on vízfürdőben tartjuk. Az ekkor keletkezett piros színű oldat színintenzitását X 520 m^-nál Beckman, ill. egyéb fotométerben megfelelő színszűrő alkalmazásával megmérjük. Az előre elkészített standard görbéből a fermentációs folyadékban jelenlevő androsztadiéndion szint így egyszerűen leolvasható. A különböző időpontokban vett minták androsztadiéndion tartalmát az idő függvényében grafikusan ábrázoljuk (lásd 1. ábrát). Az így kapott grafikonból extrapoláció segítségével az optimális leállási idő egyszerűen meghatározható. 2. példa: Az 1. példával azonos, azzal az eltéréssel, hogy színképző reagensként merkuriklorid-kénsavas reagenst (1 lit. 24 n H2S0 4 + 0,005 mol HgCl 2 ) alkalmazunk. A mérési hullámhossz itt is X = = 520 m/x. 3. példa: Az 1. példával azonos, azzal az eltéréssel, hogy színképző reagensként Kober és Haenni ösztron meghatározására leírt módszerében szereplő reagenst használva, a reakció körülményeket az 1. példa szerint módosítva (melegítés 10 perc, 100 C°) és a kapott élénksárga színű oldat abszorpcióját X = 465 m/x-nál mérjük. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás z]'>4 -androsztadiéndion meghatározására fermentációs folyadékban, melyre jellemző, hogy a fermentációs folyadékot apoláros oldószerrel kivonatoljuk, a kivonatot bepároljuk, a maradékot az androsztadiéndionnal színes reakció-terméket adó reagenssel elegyedő oldószerben feloldjuk, ezen reagenssel a színreakciót létrehozzuk, a kapott oldat színintenzitását mérjük és az androsztadiéndion tartalmat e színintenzitás alapján meghatározzuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a fermentációs oldat kivonatolására széntetrakloridot alkalmazunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a kivonat bepárolása után kapott maradékot alkoholban, éterben, savakban vagy savamidban oldjuk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a kivonat száraz maradékának feloldására etilalkoholt használunk. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli alakja, melyre jellemző, hogy az androsztadiéndion színes termékének előállítására kénsavas közeget használunk. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a színreakciót kénsavas közegben jód, fenol, vas, higany, arzén, króm vegyületek vagy ezek elegyével létesítjük. 7. Az 1—6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy a színes reakció termék előállítását növelt hőmérsékleten, előnyösen 100 C°-on és előnyösen 10 percig végezzük. 1 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 594048. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.
