145482. lajstromszámú szabadalom • Száj- és körömfájás elleni koncentrált vakcina előállítása
Megjelent: 1959. november 15. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 145.482. SZÁM ; 30. h. 1—8. OSZTÁLY — Rí—164. ALAPSZÁM Száj- és körömfájás elleni koncentrált vakcina előállítása A Magyar Állam, mint a feltaláló: dr. Richter János kutatóvegyész, budapesti lakos jogutódja A bejelentés napja: 1955. december 19. Száj- és körömfájás elleni vakcinát általában úgy állítanak elő, hogy akár mesterségesen fertőzött marha nyelvéből, akár pedig más fertőzött állatból, vagy szövettenyészetből származó vírustartalmú anyagot nagymennyiségű vízzel extrahálnak. Az extraktumot a baktériumok eltávolítása céljából Séitz szűrőn szűrik, vagy phenollal, toluollal, anisollal, vagy chloroformmal kezelik és legtöbbször puferral kevert steril Al(OH)3-geIhez elegyítik. A keverékben levő fertőző vírust hőkezeléssel, formaldehiddel, vagy pH-változtatással gyengítik. Az így készült vakcina adagja marhánként általában 30 ml. Sok szempontból előnyös, ha a vakcina adagja nem több néhány ml-nél. Ebből a célból olyan eljárást dolgoztak ki, amely szerint a vírustartalmú alapanyagot lényegesen kisebb mennyiségű vízzel extrahálják. Az így készült tömény oldatot csak nagy vírusveszteséggel lehet Seitz szűrőn csírátlanítani, ezért úgy jártak el, hogy az extrakciós elegyhez néhány százalékos mennyiségben chloroformot elegyítettek baktericid célból. Chloroform hatására a fehérjék egy része is oldhatatlanná és így kiszűrhetővé válik. Megállapítottam azt, hogy 8-18 szénatomos láncot tartalmazó quaternaerammónium vegyülettel előnyösen hexadecylpyridinium bromiddal (pl. Nitrogenol vagy Sterogenol), vagy kloriddal fehérjeoldatokból a fehérjét a pH értéktől és a quaternaerammónium vegyület koncentrációjától függően frakcionáltan lehet kicsapni. Megállapítottam továbbá azt, hogy az említett quaternaerammónium vegyületek, amelyek közismerten kiváló fertőtlenítő szerek, tág koncentrációs határok között nem károsítják a száj- és körömfájás vírusát. Fenti két tulajdonságot előnyösen lehet felhasználni arra, hogy a koncentrált víruskivonatot az immunizáláshoz szükségtelen ballaszt fehérjéktől megszabadítsuk és egyben a vírusoldatban levő baktériumokat elöljük. A felsoroltak tekintetbevételével sokféle vakcina készíthető, amelyek pl. koncentrációban és ettől függően adagjában, a felhasznált anyagok hozzáadásának sorrendjében, vagy módjában, illetve vírustípusban különböznék egymástól. Az alábbiakban a sokféle lehetőség közül egy példát ismertetek. 150 g.C-típusú vírust tartalmazó fagyasztott nyelvhám -f- limfa vírusalapanyagot húsdarálóban megdaráltam, majd 100 ml steril hideg vízzel 10 percig Turmixban tovább aprítottam, figyelve arra, hogy a hőmérséklet 28 C° fölé ne emelkedjék. (Szükség esetén steril jégkockákat adagolunk a Turmixba.) Ezután 400 ml steril vizet hozzáadva, az anyagot még 20 percig kevergetve extraháltam. Az elegyet centrifugáltam, a tisztáját félretettem, a maradékot pedig újabb 100 ml. steril hidegvíz hozzáadása után, 10 percig'kevergetve extraháltam és újra centrifugáltam. A szupernatánst az előző szupernatanüsal elegyítettem és 2 ml annyi vízzel hígított Nitrogenolt adtam hozzá, hogy az egyesített oldatok összmennyisége 600 ml legyen. Félórát szobahőn (23 C°) állni hagytam, miközben dús csapadék képződött. Ez ballasztfehérjéket, köztük elölt baktériumokat tartalmaz. A csapadékos anyagot centrifugáltam és a szupernatánst hozzáöntöttem 400 ml steril Al(OH)3 gélhez, amelynek pH értéke 7,8 és A12 0 3 tartalma 2,7 % volt. Tizenötperces keverés után a keverést abba nem hagyva, 20 ml 2 %-os formaldehid oldatot öntöttem hozzá és ettől az időtől kezdve 24 órán át lassú keverés közben 26 C°-on tartottam az anyagot. Az idő leteltével + 4 C°-on tároljuk a kész vakcinát. Az így készült vakcina 1,5 ml-es adagja immunizálta a szarvasmarhákat a C-típusú száj- és körömfájás fertőzéssel szemben. A fent ismertetett vakcina előállítás gyártástechnológiája rendkívül egyszerű és viszonylag olcsón kivitelezhető. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás száj- és körömfájás elleni koncentrált vakcina készítésére, azzal jellemezve, hogy a vírustartalmú kivonatot a szükségtelen fehérjék kicsapása és az oldat csírátlanítása céljából 8-18 szénatomos láncot tartalmazó quaternaerammónium vegyülettel elegyítjük. 2. Az 1. sz. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja azzal jellemezve, hogy quaternaerammónium vegyület gyanánt előnyösen hexadecylpyridinium bromidot (Nitrogenol), vagy kloridot alkalmazunk. 3. Az 1. és 2. sz. igénypontok szerinti eljárás kiviteli módja azzal jellemezve, hogy a koncentrált víruskivonathoz előnyösen 2-10 adunk. o/. oo Nitrogenolt A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. /„ 2561. Terv Nyomda, 1959.
