144971. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az agyfüggelék mellső lebenye adrenokortikotrop hormonjának nagy aktivitású kész1tményei előállítására

Megjelent: 1959. június 15-én. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 144.971. SZÁM 30. h. 1—8. OSZTÁLY — SCHA—64. ALAPSZÁM Eljárás as agyfüggelék mellső lebenye adrenokortikotrop hormonjának nagy aktivitású készítményei előállítására Dr. Schäfer Gerhardt vegyész, Badebeul (Német Demokratikus Köztársaság) A bejelentés napja: 1957. június 6. Pótszabadalom a 144103 lajstromszámú törzsszabadalomhoz. A 144.103 lajstromszámú törzsszabadalom eljárást ismertet az agyfüggelék (hypophysis, agyalapi mirigy) mellső lebenyének adrenokortikotrop hormonját tartalmazó nagy aktivitású készítmények előállítására. Ez: az; eljárás azon alapul, hogy a mélyhűtött agyfüggelékből sósavaceton-víz eleggyel kivonják az adrenokortikotrop hormont (ACTH), majd ezt követően a kivonatból az aceton-koncentráció növelése útján az ACTH-t kicsapják. A kapott nyers porból azután a tiszta ACTH-t oxicellulózon való adszorpcióval nyerik ki. Az ACTH az agyfüggelékben rendkívül bomlékony állapotban van jelen; kedvezőtlen körülmények között az agyfüggelékben jelenlevő proteolitikus enzimek inaktiválják az ACTH-t. • Annak érdekében tehát, hogy lehetőleg nagy hozammal kapjuk meg a hatóanyagot, feltétlenül szükséges, hogy tartós nyerstermék álljon rendelkezésünkre kiinduló anyagként a további tisztítás céljaira. Az ACTH ismert előállítási eljárásai során minden esetben mélyhűtött agyfüggelékekből indulnak ki, amelyekből azután vagy a törzsszabadalomiban leírt módon, savas-acetohos' kivonással nyerik ki a hormont, vagy pedig a megfagyasztott . agyfüggeléket ' mechanikai úton mellső- és hátsólebenyre választják szét, és a mellső lebenyt azután liofilizálással szárítják. Megállapítottam, hogy az ACTH /inaktiválása már akkor megkezdődik, amikor a megfagyasztott agyfüggeléket rövid időre felengedni hagyják, ezáltal azután az, agyfüggelék néhány óra alatt értékének számottevő részét elveszti. Emellett azonban az így kezelt agyalapi mirigyek külsőleg még frisseknek látszanak, a bekövetkezett inaktiválódás csak a költséges tisztítási eljárás lefolytatása után, a biológiai értékmérés során állapítható meg. A friss vágásból származó' agyalapi mirigyek aceton segítségével t örténő víztelenítése sem célravezető, mert a proteolitikus enzimek a víz teljes eltávolításáig tovább hatnak a mirigy szövetében és ez idő alatt az ACTH tekintélyes részét lebontják. Olyan eljárást kerestem tehát, amely kiküszöböli az eddigi eljárások e hátrányait és lehetővé teszi a mirigy ACTHLtartalmának csaknem teljesen veszteséglmentes kinyerését. Ennek során abból az; ismert tényből indultam ki, mely szerint az; agyfüggeléfcben jelenlevő proteolitikus enzimek hatása savas közegben, 1,5-nél nem nagyobb pH-érték. esetén, oly mértékű gátlást szenved, hogy a hormon, észrevehető inaktiválódása már nem következik be. A találmány értelmében tehát megállapítottam, hogy az agyfüggelékek 1,0 és 1,5 közötti pH-értékei sósav-aeeton-elegyben való tartósításia alkalmas arra, hogy tartós nyersterméket kapjunk a további feldolgozás céljaira; amely a korábbi mg-kint, 0,5—0,8 NE (nemzetközi egység) hatóanyagtartalmat nyújtó eljárással szemben lényegesen nagyobb, 2,0—2,5 NE/mg tisztasági fokú terméket, számottevően nagyobb hozammal biztosít. Példa: A friss vágásból származó agyfügpelékeket azonnal olyan sósav-aceton-elegybe visszük, amelynek pH-értéke 1,0 és 1,5 között van. A szervek összes mennyisége az acetonhoz viszonyítva 1:5 aránynak feleljen meg. Továbbfeldolgozás céljaira azután az agy függelékéket egy szitára helyezve mentesítjük az acetonos elegytől. Az így különváló acetonos elegy tekintendő azután a szervek első kivonatának (A). A szerveket ezután még acetoatól nedves állapotban, húsdarálón megdaráljuk,majd 75% acetontartalmú és 1,0—1,5 pH-értékű sósav-afeeton, víz elegy négyszeres mennyiségével két ízben extraháljuk (B és C kivonatok). Szűrés után az egyesített A + B -f- C kivonatból az aoetontartalom kb 95%-ra növelése útján kicsapjuk a nyers hormont. A csapadék leülepedése után az acetont leszivornyázzuk, a csapadékot acetonnal mossuk és vákuumban megszárítjuk. 1 kg friss, sertés-agyfüggelékre számítva kb. 15 g nyers hormont kapunk, amelynek ható-