144389. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fermentációk mikroorganizmusainak kinyerésére fermentleveikből koaguláltatással
2 144.389 stb. jönnek figyelembe .Csapadékképző kationként általában a II. és III. osztályú kationok vízoldható sói jönnek számításba. Megállapítottuk, hogy a csapadékban a mikroorganizmusokat összetartó agglutinációs kötés igen laza és erősebb mechanikai beavatkozással pl. intenzív keveréssel, rázassál stb. megszüntethető. E laza kötésből folyhat a találmány szerinti eljárásnak az a különleges további előnye, hogy a koaguláltatás a mikroorganizmusok életképességét (virulenciáját) nem befolyásolja és azok ily módon tömörítve oltóanyagként közvetlenül is felhasználhatók. Meglepő, hogy azok a fémsók is, melyeket baktericid (sporicid) anyagokként ismerünk, a mikroorganizmusok találmány szerinti koaguláltatására jól felhasználhatók anélkül, hogy azokat károsítanák. Lényeges eleme a találmánynak, hogy a csapadékot magában a fermentleben állítjuk elő, mert a csapadék in statu nascens fejti ki legelőnyösebben a kívánt agglutinációs hatást. A külön előállított csapadéknak a fermentléhez való keverése kevésbé alkalmas a mikroorganizmusok tömögflésére. A találmány szerinti agglutinációnak is van bizonyos fokú specificitása. i^fctömörítés optimális körülményei mikroorganizmus fájtánként és táptalajonként változnak. Ezeket a körülményeket a fermentálás kivett mintáiból beállított kísérletsorozatban kell megállapítani, h°gy jó agglutinációt, ülepedést és szűrhetőséget érjünk el. A találmány szerinti eljárás ipari alkalmazása elsősorban bakteriális fermentációknál értékes, gombatenyészetek tömörítésénél felhasználási lehetősége korlátozott. 1. példa Rhisobium Meliloti törzset 48 órán át steril levegőztetéssel fermentálunk a következő steril táptalajon: 1,0% szójaliszt főzet, 1,0% szacharóz, 0,1% dikáliumhidrofoszfát krist., 0,1% nátriumklorid krist., 0,01% magnéziumszulfát. A fermentáció után az oldat pH-értéke 7,6—7,8. A fermentléhez lassú keverés közben 1 tf.-% 10%-os techn. A12 (S0 4 ) 3 vizes oldatát adjuk. Jól ülepedő csapadék válik le. A víztiszta szupernatans mikroszkópos képében csak szórványosan lehet baktériumot találni. A folyadék tisztájának leszivatása után a leülepedett csapadékot centrifugálással tovább tömörítjük és vákuumszárítás vagy liofilizálás után talaj oltóanyag céljára használjuk. 2. példa Propionbacterium Shermanii tözzsel négynapos steril anaerob fermentálást végzünk B 12 vitamin termelése céljából a következő táptalajon: 1,4% kukoricalekvár, 1,0% glükóz, 1,0% kalciumkarbonát, 0,002% 5,6-dimetil-benzimidazol. A fermentáció végével a fermentléhez addig adunk 10%-os nátronlúg oldatot, míg az fenolftalein papíron maradandó piros színeződést mutat (pH 9—9,5). Ekkor a keverést továbbfolytatva addig adagolunk 20%-os A12 (S0 4 ) 3 oldatot az elegyhez, míg a pH közel semlegesre visszaáll (pH 7,3—7,5). Jól ülepedő csapadék válik le, melyet a szupernatans leszivatása után centrifugán elkülönítünk. A csapadékot KCN jelenlétében felforralva feltárjuk. A feltárt baktériumszuszpenzió B 12 vitamintartalma Colilemezes méréssel 10 gamma/ml, míg a szupernatans csak 0,1—0,3 gamma/ml B 12 vitamint tartalmaz. 3. példa 1,0 % etanol, 0,4 % nátriumkarbonát, 0,1 % ammóniumklorid, 0,04% dikáliumhidrofoszfát és 0,01% magnéziumklorid tartalmú táptalajon Methanobacterium Omelianskii törzzsel fermentációt végzünk B 12 vitamin termelése céljából. A 30 C°-on végzett folyamatos fermentálásból naponta leeresztett termékhez enyhe keverés közben literenként hozzáadunk 15 ml 20%-os A12 (S0 4 ) 3 oldatot. A felszabaduló gázbuborékok eltávolítására a keverést még 10 percig folytatjuk, majd az oldatot ülepítjük. 3 órás ülepítés után mintegy 70% szupernatans különül el, melyet leszivatunk és elöntünk, miután B 12 tartalma Coli-lemezes méréssel csak 0,01 gamma/ml. Az üledéket centrifugálással tovább tömörítjük, majd 4 tf. vízzel KCN jelenlétében felforraljuk és szűrjük. A szűrlet világos rózsaszínű, B 12 tartalma 3,0 gamma/ml. 4. példa A 3. példa szerinti, de üzemi méretű fermentálásból leengedett 40 m3 fermentlevet 4 db 10 m3 -es tartályba szétosztjuk és pneumatikus keverés közben minden tartályba beengedünk 200 liter 20%-os A12 (S0 4 ) 3 oldatot. 10 perces keverés után az anyagot ülepedni hagyjuk. 8 órai ülepítés után kb. 30 m3 szupernatans dekantálható és elönthető, miután B 12 vitamintartalma csak 0,01 gamma/ml. A visszamaradt kb. 10 m3 üledékből közvetlen feldolgozással oly szűrletet nyerünk, mely ml-enként 0,9—1 gamma B 12 vitamint tartalmaz. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás mikroorganizmusok kinyerésére fermentációs leveikből koaguláltatással, melyre jellemző, hogy a mikroorganizmusokat a fermentlevekben létesített csapadékkal agglutináljuk és a csapadékot az ismert elválasztó műveletekkel elkülönítjük. 2. Az 1. alatti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a csapadékképzéshez szükséges reagensek egyikét a táptalaj egyik komponense alkotja, míg a másik komponenst a fermentáciá befejezte után adjuk a fermentlevekhez.
