144103. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az agyfüggelék mellső lebenye adrenokortikotrop hormonjának nagy aktivitású készítményei előállítására

Megjelent: 1958. augusztus hó 1-én. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 144.103. SZÁM 30. h. 1-8. OSZTÁLY — Scha—54. ALAPSZÁM Eljárás az agyfüggelék mellső lebenye adrenokortikotrop hormonjának nagy aktivitású készítményei előállítására Dr. Schäfer Gerhardt, vegyész, Radebeul (NDK) A bejelentés napja: 1956. március 26. A találmány eljárás az, agyfüggelék mellső lebenye adrenokortikotrop hormonjának nagy aktivitású készítményei előállítására. Ismeretes, hogy a hipofízis mellső lebenyéből hormon különíthető el, mely a mellékvesekérget serkenti., Ez a hormon, az, ACTH, az utóbbi években mind a gyógyászatban, mind a diagnosztikában számottevő jelentőségre tett szert. A nagytisztaságú ACTH-készítmények előállítása az ismert módszerekkel igen hosszadalmas és költséges. Ehhez járul, hogy a hosszadalmas feldolgozási műveletek a tiszta hormon kitermelését, csökkentik. Az említett hormon előállítási eljárásai szorosan követik a korszerű fehérjefrakcionáló módszereket. E módszerek szerint a kiindulási anyagot, éspedig a sertés, juh, cethal vagy szarvasmairha agyfüggelékét, erősen megsavanyított vizes acetonnal többszörösen kivonatolják. Az egyesített kivonatokból az, ACTH-tartalmú frakciót az aceton töménységének fokozásával nyerik ki. Az így kapott nyershormonból, mely mg-onként átlagosan 0,5 IE hatóanyogat tartalmaz, a többi hormon túlnyomó részét vagy a pH változtatásával, vagy szakaszos kisózással csapják ki. A tisztított és dializáit kivonatból, ezután az ACTH-t acetonnal kicsapva, tovább dúsított alakban (kb. 2 IE/mg) vonják ki. A termék ebben az alakjában még számottevő mennyiségű agyfüggelék-hátsólebeny hormonokat, valamint kismennyiségű növekedési, laktációs és gonadotrophormont tartalmaz. Ezeket a kísérőanyagokat savval és hőkezelléssel elroncsolják. Ennél a munkafolyamatnál azonban az ACTH bizonyos százaléknyi részének inaktiválódása elkerülhetetlen. Ismeretes,, hogy az ACTH további dúsítása különböző módon eszközölhető, pl. kationkicserélőkön való adszorpciója vagy az ACTH savas vagy pepszines hidrolizise és ehhez csatlakozó kromatografálás útján. Ismeretes továbbá, hogy az oxicellulózán való adszor beáitatás a dúsítás céljára különösen előnyösnek bizonyult és hogy ez a tisztítási módszer igen nagy tisztaságú készítményekhez vezet, melyek még intravénás injekciókként is minden hátrány nélkül felhasználhatók. A találmány eljárás, mellyel a feldolgozási folyamat lerövidíthető és egyszersmind a tiszta hormon kitermelése fokozható. Megállapítottam — és ebben van a találmány —, hogy az oxidált cellulózán való adszor beáitatás alkalmas arra, hogy közvetlenül a nyershormonból minden további tisztítási művelet mellőzésével nagy aktivitású ACTH-készítményekhez jussunk, melyek ezenfelül a többi hipofizishormonítól is mentesek. Ez a körülmény különösen előnyös, mivel főként a hipofízis hátsólebeny hormonjai az, ACTH-készítményekhez makacsul tapadnak és ezektől csupán igen bonyolult, és veszteséges frakcionálóműveletekkel különíthetők el. A találmány szerintii eljárás lehetővé teszi továbbá a nyershormonpor nem-adszorbeált részleteiből a további hipofízis hormonok elkülönítését és gyógyászati hasznosítását, holott az, eddigi eljárásoknál, mint fentebb mondottam, ezeket savval való hevítés útján kellett roncsolni, miközben az ACTH egy része is inaktívvá vált. Példa: Friss, fagyasztott sertéshipofizis 0,5 kg-ját a legfinomabban felaprítjuk és szuszpendáljuk 2 1 aceton, 0,25 1 víz és 50 ml tömény sósavból készült elegy 2 literében. Az elegybe addig adagolunk szilárd szénsavat, amíg az —20—25°-ra le, nem hűlt. Ezután az elegyet forró vízfürdőn 20 percen belül +20°-ra melegítjük és csatlakozólag 1 óra hosszat erélyesen kavarjuk. Szűrés után a maradékot 1 óra hosszat 1 1 80%-os acetonnal mégegyszer kivonatoljuk. Az egyesített kivonatokat beöntjük 15 1, —5°-ra lehűtött acetonba. A csapadékot leülepedése után acetonnal alaposan mossuk és vákumban szárítjuk.Termelés: kb. 16 g nyerspor mg-onként kb. 0,5 IE hormontartalommal. A port feloldjuk 500 ml 0,1 mol-os ecetsavban és az oldat pH-értékét 3,0—4,0-re beállítjuk. Ehhez az oldathoz, hozzáadjuk 11—12% karboxiltartalmú olyan oxicellulóza 1,5 g-ját,