143834. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12-vitamin előállítására erjesztési módszerrel
Megjelent: 1957. november hó 30-án. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 143.834. SZÁM 30. h. 1—8. OSZTÁLY — Cl—180. ALAPSZÁM Eljárás Biz-vitamin előállítására erjesztési módszerrel Bejelentő: Chinoin gyógyszer- és vegyészeti termékek gyára, Budapest. Feltaláló: dfr Simon Ágoston orvos, Budapesten. Bejelentés napja: 1955. december 13. Ismeretes volt már propionsav-baktériummal erjesztéses módszer alkalmazásával B12 -vitamint mikrobiológiai lag szintetizálni. A. Leviton és Robert E. Hargrove (Ind. and Eng. Chem. 1952/11. 2651—2655. old.) közleményükben részletesen beszámolnak a B12-vitamin mikrobiológiai szintéziséről Propionibacterium Freudenreichii (ATCC 6207) alkalmazásával. A szerzők kísérleteiknél legfeljebb 3 mg/lit. B12-vitammt kaptak a fermentációs elegyben. A magasabb eredményeket tejcukrot tartalmazó táptalajon érték el, mégpedig olyan módszerrel, hogy először Lacto-bacillus casei (ATCC 7469)-cel oltották be a táptalajt, majd pedig ezen a táptalajon fermentáltak P. Freudenreichii-vel. Azt találtuk, hogy igen jó termeléssel kaphatunk mikrobiológiai szintézis útján B12 -vitamint, ha Propionibacterium Shermanii-t. kukoricalekvárt (cornsteep liquort) tartalmazó táptalajon tenyésztünk. A P. Shermanii, amelynek tulajdonsága az is, hogy a tejet megalvasztja, egész meglepően magas B12-vitamintartalmú fermentációs elegyet képes kukoricalekvár-tartalmú táptalajon eredményezni. Az elegy 6 mg-nál is több B12 -vitamint, sok esetben 8 rng-ot is tartalmazhat literenként. A találmány szerinti fermentációt levegőztetés nélkül hajtjuk végre, tehát lényegében anaerob körülmények között; a levegő teljes kizárása azonban nem fontos, elegendő az, ha levegőztetés nélkül és keverés nélkül fermentálunk, anélkül, hogy a levegőt valamely inert gázzal kiszorítanánk. Az eljárás ipari megvalósításánál célszerű a fermentációhoz azonos táptalajon készült oltóanyagot (inoculumot) alkalmazni. Az inoculumot úgy állíthatjuk elő, hogy a táptalaj 5—20%-át először P. Shermanii-val beoltjuk és kb. 48—72 óráig erjedni hagyjuk, majd pedig az egész táptalajt ezzel beoltjuk. Az eljárásnál előnyösen használhatunk olyan táptalajt, amely a kukorícalekváron kívül még glukózt, kalciumkarbonátot, Co(No3 ) 2 6H 2 0-t és esetleg vasszulfátot tartalmaz. Co(No3 ) 2 6H 2 0 helyett természetesen használhatunk más kobalt sót, pl. kobalto kloridot; vasszulfát helyett természetesen használhatunk más vassót is. Példák: 1. 1000 g glukózból 1000 g nedves kukoricalekvárból (kb. 500 g szárazanyag-tartalom) 250 g precipitált kalciumkarbonátból és 0,25 g Co(No3 ) 2 6H 2 0-ból 50 liter vízvezetékvízben táptalajt készítünk, és a táptalajt 1 atm. túlnyomáson 30 percen át sterilizáljuk. Lehűlés után ezt a- táptalajt steril körülmények között 2 liter oltóanyaggal (inoculummal) oltjuk, amely utóbbit a táptalajjal azonos összetételű oldatból P. Shermanii-val történt 72 órás előfermentálással kaptunk. A fermentációs elegyet naponta 1—2-szer megkeverjük és 32;—35°-on tartjuk. 90 óra fermentációs idő után az elegy 4,03 gamma/ml B12 -vifamint tartalmaz, 114 óra után 4,99 gamma/ ml-t és 138 óra után 6,1 gamma/ml-t. A B12 -vitamintartalmat coli variánssal agar lemezes módszerrel mérnük (Ross-módszer). 2. 8 g glukózból, 8 g nedves kukoricalekvárból, 2 g precipitált kalciumkarbonátból, 8 mg FeS04 . 7H2 0-ból és 2 mg Co(N0 3 ) 2 . 6H 2 0-ból 400 ml vízben táptalajt készítünk és a táptalajt 1 atm. nyomáson 20 percen át sterilizáljuk. Lehűlés után a kapott táptalajt beoltjuk 5%-nyi 72 órás azonos összetételű táptalajon tenyésztett P. Shermanii-inoculummal. A fermentációs elegyet azután 32—35°-on tartjuk és naponta egyszer erősen összerázzuk. 72 óra fermentálás után az elegy 4,34 gamma/ml B12 -vitamint tartalmaz, 96 óra után 6,85 gamma/ml és 144 óra után 5,94 gamma/ml-t. A fermentációs elegyekből (ill. a baktériumsejtekből) a B12-vitamint az ismert módokon nyerhetjük ki. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás B12 -vitamin előállítására erjesztési módszerrel, azzal jellemezve, hogy Propionibacterium Shermanii-t kukoricalekvárt (cornsteep liquort) tartalmazó táptalajon tenyésztünk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a táptalait glukózból, kukoricalekvárból, .kalciumkarbonátból és Co(N03 ) 2 . 6H 2 0-ból állítjuk össze. 3. Az 1—2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentációs elegyhez vassót, célszerűen vasszulfátot adunk. 4. Az 1—3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az erjesztést 32—3E°-on végezzük. A kiadásért'felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatóin. 1927 Terv Nyomda, 1957 Felelős vezető: Gajda László
