143549. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 vitaminnak egyéb elektroneutrális kobalaminfaktorokból való elválasztására
143.549 rázva azt üvegszűrőre visszük fel, az oldószert leszívatjuk, a vörös alumíniurnoxid-ádszorbeátumot pedig absz. acetonnal átmossuk. Az oldószeres szűrletet eltávolítva' az alumíniumoxid rétegre vízzel hígított, előnyösen 50—8Q százalékos acetont rétegezünk. Az átfolyó vizes aceton leoldja az adszorbeálódott B12 -vitamint és az oldat már átfolyása közben úgy feltöményedik, hogy leesepegés közben kristálykiválást mutat.. A leoldást addig folytatjuk, míg a lecsepegő folyadék erősen színes. Az eluátumot végül annyi acetonnal elegyítjük, hogy a vízaceton aránya 1 : 5—1 : 8 legyen. A kristálykiválás gyorsan folyik le. A leszűrt és acetonnal szárított kristályos anyag tiszta B12 -vitamin. Elektroforézissel és papírkromatogfáfiávaj vizsgálva egységes anyag. A szennyeződések és kísérő faktorok részben a fenol-kloroformos kirázás vizes anyalúgjában, részben az alumíniumoxiddal kiadszorbeált sárgásbarna oldószer keverékben, részben a hígított acetonnal eluált gyengén rózsaszínű alumíniumoxidon maradnak vissza és onnan regenerálhatok. A találmány szerinti eljárás előnye egyszerű és gyors kivihetősége és szelektivitása. Eddig a B-vitamin izolálása üzemi méretben a kísérő faktorokat tartalmazó koncentrátumokból napokig tartó és jelentős anyagveszteséggel járó átr ázásokkal vagy nagyméretű oszlopon való kromatografálással és a frakciók óvatos bepárolásával volt csak megoldható. Emellett az izolált kristályos termék még mindig tartalmazott egyéb növekedési faktorokat. Ezzel szemben a találmány szerinti eljárás lényege a B12 -vitamint tartalmazó koneentrátumnak először fenolos hidroxilt és apoláris oldószert tartalmazó oldószer keverékkel való kivonatolása, majd a hatóanyagoknak az oldószeres kivonatból való ezt követő kiadszorbeálása, végül a B,2 -vitaminnak az adszorbeátumról közvetlenül kristályosításra alkalmas eluenssel való leoldása. A teljes szelektivitás elérésére a felhasznált fenol-apoláros oldószer keveréket, valamint az ezt követőleg használt adszorbenst úgy választjuk meg, hogy a jelenlevő faktorok egyik csoportja az oldószeres átrázásnál az anyalúgban visszamarad, a másik csoportja pedig az adszorbensről nem oldódik le és így nem különül el. Így pl. fenol-kloroform oldószerelegy esetén az elegyarány célszerűen 1:6, adszorbensként pedig bázikus természetű adszorbenseket választunk, pl. alumíniumoxidot. A fenol-kloroformos átrázással történő tisztítás (859.352 számú német és a 2,678.900 számú amerikai szabadalmi leírások) és a Brockmann-féle alumíniumoxidon történő kromatografálás (835,178 számú német szabadalmi leírás) egyéb műveletelemekkel kapcsolatban B12 -vitamin tisztító műveleteiként önmagukban, elsősorban a kísérő inert szennyeződések eltávolítása céljából eddig is ismeretesek voltak. Találmányunk az említett módszerek egyesített alkalmazásától lényegében tér el, amennyiben nem alkalmazza a módszerek szelektivitást biztosító, tehát lényeges műveletelemeit, azaz nem alkalmaz sem ellenáramú oldószeres kirázást, sem oszlopos kromatográfiát. A találmány szerinti eljárás tehát az ismeretes módszerektől elvileg különbözik és egyszerűbb, üzemileg könnyen megvalósítható új módszert ad meg, amely a faktoroktól való elválasztás során üzemi eredményeink szerint tökéletes szelektivitást, biztosít. Az alábbiakban példát közlünk a találmány részleteinek szemléltetésére. A felhasználandó anyagok természetesen a B12 -vitamin koncentrációjától, valamint a kísérő szennyezőanyagok és faktorok mennyiségétől függ. Az egyes reagensek helyett hasonló vagy homológ vegyületek is felhasználhatók. Így fenol helyett pl. krezol, klórfenol stb., kloroform helyett széntetraklorid, etilénklorid vagy akár benzol is, adszorbensként más mikroporózus szerkezetű szervetlen anyag, pl. fullerföld, diatomaföld, szilikagél stb., aceton helyett annak homológja vagy más poláros oldószer is alkalmas. Példa. A kiindulási anyag olyan koncentrátum, melynek 500 ml-ében fotometriásan mért 4 g B12 -vitaminra számított színező anyag van, amiből kb. 3,2 g a tiszta B12 -vitamin és 0,8 g a faktor szennyeződés. A koncentrátumot 2-szer 120 és 3-szor 60 ml 1:6 tf-arányú fenol-kloroformmal kirázzuk. Az oldószeres oldatot 2-szer 100 ml deszt. vízzel kirázzuk, az egyesített mosóvizet pedig 60 ml kloroformmal rázzuk át. Az egyesített kb. 500 ml fenol-kloroformos fázishoz 120 g Brockmann-féle Al2 0 3 -ot és 200 ml absz. acetont .adunk és 1 órai erőteljes rázás után az elegyet 8 cm 0 G'ó üvegszűrőre visszük fel. Az oldószert leszivatjuk, a téglavörös Al2 0 3 -ot kevés absz. acetonnal átmossuk. A leoldást 500 ml 70 százalékos acetonnal végezzük és a kristályosodás elősegítésére 700 ml absz. acetont adunk az eluátumhoz. A kivált kristályos anyagot szűrjük, absz. acetonnal mossuk, szárítjuk. Kitermelés 3,00 g tiszta B12 -vitaimin, mely mind papírkromatográfiás vizsgálatban, mind elektroforézissel egységes anyagnak bizonyul. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás tiszta B12 -vitamin kinyerésére olyan koncentrátumokból, melyek a B12 -vitamin mellett a faktorok közül túlnyomórészt az elektro-neutrális faktorokat tartalmazzák, melyre jellemző, hogy a koncentrátumot apoláros oldószer és fenolos hidroxilt tartalmazó vegyület elegyével rázzuk ki és a hatóanyagnak az oldószeres fázisból való kiadszorbeálása után a B12 -vitamint közvetlenül kristályosításra alkalmas eluenssel leoldjuk. 2. Az 1. alatti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy átrázó oldószerkeverékként fenol-kloroform keverékét és adszorbensként Brockmannféle aluminiuimoxidot használunk. 3. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy az adszorpciót poláros oldószer hozzáadásával tesszük teljessé. 4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy az adszorbenst az oldószeres fázishoz hozzákeverjük. 5. Az 1.—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy az adszorbensből, azt poláros oldószerben feliszapolva, szűrőágyat vagy oszlopot készítünk és a hatóanyagot tartalmazó oldószeres fázist ezen átfolyatva végezzük el az adszorpciót. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 636. Terv Nyomda, 1957. — Felelős vezető: Bolgár Imre
