143508. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11-Epikortikoszteron előállítására
0 Megjelent 1957. március hó 1-én. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 143.508. SZÁM 12. o. 25. OSZTÁLY — Go—489. ALAPSZÁM Eljárás 11-Epikortikoszteron előállítására Bejelentő: Gyógyszeripari Kutató Intézet, Budapest. Bejelentő intézet feltalálókul dr. Weisz Erzsébetet, dr. Wix Györgyöt és dr. Bodánszky Miklóst nevezi meg. A bejelentés napja: 1955. november 14. A 11-epikortikoszteron előállítására újabb időben előnyös kivitelezhetőségük folytán előtérbe kerültek a mikrobiológiai előállítási módszerek. Így a 11-a-oxi-progeszteronból biológiai oxidációval (A. Zaffaroni, C. Casas Campillo, F. Cordoba, G. Rosenkrantz Exper. XI. 219. 1955.), másrészt 21-oxipr ogeszteronból (cortexonból) Rhizopus nigricans törzzsel (J. H. Epstein, P. D. Meister, D. H. Petersohn et al: J. Amer. Chem. Soc. 75, 408, 1953) készítettek 11-epikortikoszteront. Nem ismeretes ez^ ideig olyan eljárás, amely egyetlen műveletben progeszteronból 11-epikortikoszteronhoz vezet. Kísérleteinkben az általunk izolált Aspergillus niger törzs levegőztetett tenyészeteihez progeszteront adva több oxidációs termék képződését észleltük, amelyek között lla-oxi-progeszteront, 21-oxi-progeszteront azonosítottunk, de ezenkívül elkülönítettünk egy kristályos terméket, amely részletesebb vizsgálat során 11-epkortikoszteronnak (lla-oxi-21-oxiprogeszteronnak) bizonyult. így eljárásunk ennek a gyógyászati szempontból fontos vegyületek szintézisénél felhasznaiható anyagnak igen egyszerű úton való előállítását teszi lehetővé. 2. Példa: Aspergillus niger törzs ferde agar tenyészetéről készült spóraszuszpenzió 1—1 ml-ével 100—100 rill táptalajt oltottunk be. Utóbbi összetétele: 2% malátakivonat, 1% pepton csapvízben. (Nyitva pH 6,0-ra beállítva sterilizálás előtt). A táptalajt 121° C-on 500 ml-es Erlenmeyer lombikban sterilizáltuk. A beoltá? után a tenyészetet 28 fokos termosztat szobában rázóasztalon inkubáltuk. Az oltástól számított 48 óra elteltével lombikonként 20—20 mg progeszteront adagoltunk, majd a tenyésztést további 72 órán at folytattuk. 38 rázólombik tartalmát egyesítve a fermentátumot szűrtük, a micéliumot 240 ml acetonnal, majd 240 ml kloroformmal mostuk. Az egyesített szüredéket 860 ml, majd kétszer 1100 ml kloroformmal vontuk ki. A szerves fázisokat egyesítve 350 ml n/10 HCl-el 350 ml 2%-os Na HCO,; oldattal és végül 350 ml vízzel mostuk, NaaSCM-el szárítottuk és csökkentett nyomáson az oldószert eltávolítottuk. A maradék olajat 60 ml benzolban vettük fel és 30 g savval mosott és aktivált Brockmann-féle Al2 0 3 -ból készült oszlopon kromatográfiával frakciókra osztottuk. Eluáláshoz' benzolt, benzol-éter elegyet, étert és éter-etilacetát elegyet, végül pedig etilacetátot használtunk. Az egyes frakciókat papírkromatográfiával vizsgáltuk propilénglikol-toluol rendszerben. (A. Zaffaroni, R. B. Burton, E. H. Kaufmann: Science Hl, 7, 1950.) A papírkromatográfiás vizsgálatok a progeszteron teljes átalakulásáról tanúskodtak, 'az éter etilacetát elegyet tartalmazó eluátum frakció bepárlásakor kristályok maradtak vissza, melyeknek etilacetát hexánból való átkristályosítása 153—154° C-on olvadó, [af°° = + 163°. (C=o, 6 etanol) fajlagos forgatóképességű termékhez vezetett. (H. Epstein, T. D. Meister, D. H. Petersohn et al.: J. Amer. Chem. Soc. 75, 408. 1953.) idézet szerint a 11-epikortikoszteron 150—155°-on olvad, fajlagos: forgatóképesség +165°, c=0,7 etanol). A termék azonosságát papírkromatográfiával is megerősítettük. 2. Példa: A fentebb megnevezett törzs spóraszuszpenziójával 5 liter táptalajt oltottunk be. A táptalaj összetétele azonos az 1. példában leírttal. A beoltott táptalajt 10 l-es üvegfermentorban levegőztetés közben kevertük 28° C-on. A készülékben " az oxigén elnyelést szulfit módszerrel mérve (C. A. Cooper, G. A. Fernstrom, S. A. Miller: Ind. Eng. Chem. 36, 504, 1944.) 14 m. mol/hter/óra értékűnek találtuk. A 48 órás tenyészethez 1 g (25 rcilacetonban oldott) progeszteront adtunk. A tenyésztést változatlan körülmények között további 72 órán át folytattuk. A fermentátum pH-ja ekkor 2,4-re esett le. A feldolgozás az 1. példában leírt módon történt. Szabadalmi igény-pontok: ]. Eljárás 11-epíkortikoszteron előállítására progeszteronból egy lépésben azzal jellemezve, hogy Aspergillus niger tenyészeteihez progeszteront adunk és a tenyésztést aerob körülmények között folytatjuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgaloje 2987. Terv Nyomda. 1956. — Felelős, vezető: Bolgár Imre
