142834. lajstromszámú szabadalom • Eljárás adenozintrifoszforsav és sói előállítására

2 142.834 visszaszorítható, ha a műgyantaoszlopra felviendő ATP tartalmú oldat anionkoncentrációját már eleve 0.05—0.3 normálra állítjuk be. A műgyantaoszlpp magasságát és az átfolyási sebességet az adottságok szabják ínég és e tényezők optimumát mindénkor kísérletileg kell megállapítani. Azt találtuk továbbá, hogy a denaturálás után kapott állati szövetkivonatban oldott fehérje egész mennyiségében leválasztható, ha a kivonat-oldatot H-ciklusban levő, erősen savas kationcserélő műgyanta megfelelő mennyiségével elkeverjük. Az oldat pH értéke ekkor 3—3.5-re áll be és az oldott fehérje jól szűrhető pelyhes csapadék alakjában kiválik. Az itt kapott szűrletet a fentiek szerint dolgozzuk fel. A találmány szerinti eljárással az adenilpirofoszforsav bármely sója, bármilyen tisztasági fokban, még igeri csekély ATP-tartalmú vizes kivonatból is izolálható: Az eljárás megismétlésével a végtermék minősége — bizonyos anyagveszteség árán — a kémiai tisztaságig fokozható. A találmány részleteinek szemléltetésére az alábbiakban néhány kiviteli példát közlünk, mely részleteiben, a kiindulási anyaghoz, valamint az alkalmazott ioncserélő műgyanta minőségéhez igazodik. 1. példa. 100 kg friss állati izomzatot darálás után forró alkohollal denaturálunk, majd a denaturált termer ket levegőn megszárítjuk. A száraz izomport, mely a fehérjék denaturálódása folytán most már vízben oldható alakban tartalmazza az adenilpirofoszforsavat, összesen 200 1 vízzel kétszer hidegen kivonatoljuk. A sajtolás útján nyert izomkivonatot 6 kg H-ciklusban levő erősen savas kationcserélő műgyantával összekeverjük. Az oldat pH-ja az ioncsere következtében 3—3.5-re áll be és ugyanakkor az oldott fehérje jól szűrhető pelyhes csapadék alakjában kiválik az oldatból. A szűrletet ezután 2 kg klorid-ciklusban levő, Dowex 2 műgyantát tartalmazó 7 X 150 cm-es oszlopra visszük fel, percenkénti 200 kern átfolyási sebességgel. Ezután a gyantaoszlopot először 5 1 desztillált vízzel, majd 20 1 pH értékre beállított 0.2 normál konyhasóoldattal kimossuk. A kimosás után a gyantán most már csak az ATP van jelen, melyet 15 1 olyan normál konyhasó-oldattal eluálunk, mely 150 kcm konc. sósavat is tartalmaz (pH = 2). Az eluálás sebessége 30—40 kcm percenként. A kapott oldatból az ATP savanyú nátriumsóját hűtött.körülmények között alkohollal, ismert módon leválasztjuk. Kitermelés 195 g ATP-Na, mely Fiske-Subbarow módszerével vizsgálva 76% ATP Na-ot tartalmaz. 2. példa. 280 g Fiske-Subbarow módszerével 55%-os, elektroforetikus módszerrel 30% tényleges ATP-tartalmú alapanyagot 10 1 hideg desztillált vízben feloldunk és az oldatot 2 kg klorid-ciklusban levő Dowex A kiadásért felel a Nyomta 2161. Terv Nyomda. 1955. -2 műgyantával töltött 5X200 cm méretű oszlopra öntjük fel, 60 kcm/perc átfolyási sebességgel. Az oldat felvitele után az oszlopot előbb 5 1 desztillált vízzel, majd 20 1 5 pH értékre beállított 0.2 normál konyhasó-oldattal kimossuk. Az ATP leoldását olyan konyhasó-oldattal végezzük, amely sósavra nézve 0.1 mólos, konyhasóra nézve 1 mólos. A kapott oldatból az ATP mbnonátriumsóját ismert módon izoláljuk. Kitermelés 98 g. Fiske-Subbarow módszerével 79%-os ATP-Na, mely elektroforetikus módszerrel meghatározva 68.1% tényleges ATP-NA-nak felel, meg. Felhasznált irodalom: K. Lohmann, Biochem. Zeitschrif. 233. 460. (1931) S. E. Kerr, J. biol. Chem. 239. 121. (1941) A. L. Dounce, J. biol. Chem. 174. 361. (1948) M. Bielschowsky, Biochem. Journ. 47. 105. (1950) Waldo—Cohn—Carter. J. Am. Chem. Soc. 72. 4273. (1950) 141.541 sz. magyar, 856.739 sz. németes 2,645.637 sz. amerikai szabadalmi leírások. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás adenozintrifoszforsav és sói ' előállítására ioncserén alapuló módszerrel, melyre jellemző, hogy a fehérjementes adenozintrifoszforsav tartalmú oldatot só formájában levő, erősen bázisos anioncserélő műgyantára visszük fel. 2. Az 1. alatti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a kivonat-oldatot klorid- vagy acetátciklusban levő erősen bázisos anioncserélő gyan.tára visszük fel. 3. Az 1. vagy 2. alatti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a kiindulási kivonat-oldatot az erősen bázisos anioncserélő gyantára való felvitele előtt az oldott fehérje-tartalom eltávolítása céljából, H-ciklusban levő, erősen savas kationcserélő műgyantával kezeljük. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a kivonat-oldat átfolyatása után az erősen bázisos műgyanta-oszlopot célszerűen az alkalmazott műgyanta anionjával azonos anion-tartalmú oldattal eluáljuk. 5. A 4. alatti eljárás kiviteli i^qdja, melyre jellemző, hogy a műgyartte-oszlopot először hígabb, előnyösen 0.05—0.3 normál, majd koncentráltabb, előnyösen 1—2-szer normál anionkoncentrációjú oldattal eluáljuk. 6. Az 1—5. alatti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a műgyanta-oszlopra felönteadő ATP-tartalmú oldat anionkoncentrációját már eleve 0,05—0.3 normálra állítjuk be., 7. Az 1—6. alatti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a kapott végtermék tisztaságát az ioncserén alapuló módszer ismételt alkalmazásával fokozzuk. , »'ányeilátó Vállalat igazgatója. • Felelős vezető: Bolgár Imre