140151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás virusz proteinekelválasztására nem viruszos proteinekből
140151 3 A 3. táblázat mutatja a Lee-féle virusszal elért eredményt. 3. táblázat. u M mg 1 < N c^ ob» Ja O O % be öS ob» Lee-féle allantoidális folyadék 102 0,80 127 Lee-féle allantoidális folyadék alkohollal lecsapva és 7 és '/2-szeresen töményítve 735 0,236 3115 97 Lee-féle allantoidális folyadék alkohollal lecsapva és centrifugágálással 5-szörösen töményítve 485 0,033 14700 95 Az alábbi táblázat a hasonlóan kezelt Weissvirusszal elért eredményekt mutatja: 4. táblázat. o o ÄÜ •«1 £ Weiss-féle allantoidális folyadék 177 0,96 184 alkohollal lecsapva, 7.5-szeresen töményítve 1324 0,336 3940 99 alkohollal töményítve, centrifugálva és 5-szörösen töményítve 815 0,048 16980 92 alkohollal lecsapva, centrifugálva és alkohollal újból lecsapva, 5-szörösen töményítve 622 0,027 24520 76 % A metanollal lecsapott virusz viszonylagos fertőzőképessége három egymásután következő metanolos lecsapolással nem szenvedett. A végső termék fertőzőképessége 10~8 -5 volt, az ellenőrzőanyag titrálása pedig 10~8 -75 fertőzőképességet mutatott. A fent leírt eljárás sokféleképpen módosítható, így pl. alkohol helyett más proteinlecsapószert, pl. acetont használhatunk. Az ismételt lecsapásokat változó körülmények között, nevezetesen különböző hőmérsékleten, alkoholtöménységgel, pH és ionerősséggel végezhetjük, amelyek lényegileg idegen proteinektől mentes virusz előállítását teszik lehetővé. A lecsapást pH 5—8 határok között, az oldat fagypontjától mintegy +5X°-ig terjedő hőmérséklet mellett és 0,005—0,5 ionerősséggel, végül pedig 15— 40 térfogat %-os alkoholtöménységgel végezhetjük. Minthogy ezen változó tényezők egymástól függenek, a tisztítás szempontjából optimális értékeket a megadott határok között végzett egyszerű próbálgatással állapíthatjuk meg. Rendes körülmények között az élő szövetekből készített vizes virusz-szuszpenzió pH-ját, vagy ionerősségét nem kell külön beállítani, mert ezek az értékek a megadott határok között feküsznek. Ha a nyers viruszkészítmény túlsók szövetet tartalmaz, ezt az eljárás bármely szakaszában lassú oentrifugálással vagy más módon eltávolíthatjuk. így pl. a viruszt tartalmazó anyagot alkoholos lecsapással eredeti térfogatának huszadrészére sűrítve, mintegy 6.2 pH mellett 0,02 moláris foszfát-pufferoldatban szuszpendáljuk. Aránylag lassú centrifugálás után a szövetrészek és az idegen proteinek nagy része a folyadékban marad, míg a virusz leválik. Ezzel az eljárással a viruszproteineket az idegen proteinektől elkülöníthetjük. A szedimentált viruszt megfellő, pl 0,1 moláris 7 pH-s foszfát-pufferoldatban, újból szuszpendáljuk. Amint fent említettük, az idegen proteineket ismételt alkoholos lecsapással is elválaszthatjuk, de célszerűbb az alkoholos lecsapást a centrifugálással kombinálni. így olyan proteinrészleteket lehet eltávolítani, amelyek sem egyedül alkoholos lecsapással, sem pedig egydül centrifugálással nem távolíthatók el. Ugyanis némely idegen protein a viruszproteinhez hasonló szedimentációs tulajdonságot mutat és így egyedül centrifugálással nem- választható ki, ellenben a kétféle proteinanyag viselkedése alkoholos lecsapással szemben eléggé eltér egymástól ahhoz, hogy az: ismertetett eljárással, tehát alkoholos lecsapással és frakcionálással egymástól elkülöníthető legyen. A fent leírt eljárás úgy immunizáló vakcinák, mint diagnosztizáló antigénák előállítására alkalmas. Az eljárás részletei a szakmabeliek előtt ismeretesek. A hordozóanyag, amelyben a virusz elosztandó, valamint a végtermék titere a kívánalmaknak megfelelően választandó meg. A fent influenzaviruszra leírt eljárás más viruszok, pl. a Rickettsiák, többek között a keleti és nyugati ^encephalomyelitis, sárgaláz, St. Luis encephalitis, Colorado kullancs-láz, veszettség, psittacosis, Rocky Mountain foltos láz, járványos .és patkánytifusz, foltos tifusz, Q-láz, Jap B encephalitis, poliomyelitis és Newcastle viruszoknak tiszta állapotú előállítására is használhatók. Szabadalmi igényponfok: 1. Eljárás viruszos proteinek elkülönítésére a nem viruszosoktól, amelyre az a jellemző, hogy a viruszos és nem viruszos proteinek hideg, vizes szuszpenziójához, a hőmérsékletnek 5 C° alatt tartása mellett, 15—40 térfogatszázalék szerves proteinlecsapószert adunk és a lecsapódó viruszos proteint elkülönítjük a nem viruszosoktól. 2. Az 1. igénypontban meghatározott eljárás megvalósítási módja, amelyre az jellemző, hogy a viruszproteinek 5—8 közötti pH-s 0,005— 0,25 közötti ionerősségű és 5 C°-nál alacsonyabb hőmérsékletű vizes szuszpenziójához 15— 40 térfogatszázalék alacsonyabb alifás alkoholt, pl. metil- vagy etilalkoholt adunk oly lassan, hogy a viruszproteinek denaturálását elkerüljük, majd pedig a csapadékot elkülönítjük. 3. Az 1. vagy 2." igénypontban meghatározott eljárás megvalósítási módja;, amelyre az jellemző, hogy a lecsapott viruszproteint újból
