139965. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ismeretlen szerkezetű hormonoknak testfolyadékokból és nyersanyagokból, valamint virusoknak oltóanyagoknak, toxinoknak és antitoxinoknak kultúrákból kriolitikus módszerrel való elkülönítésére és feltöményítésére
139965. vízben oldhatatlan anyagot oldunk, amelylyel szemben az irányítottan adszorbáló molekulák csoportjai affinitással viseltetnek. Célszerűen a dezaggregálást úgy is elő-5 segíthetjük még, hogy a hidegeffektus hatását magnetostriktiv hatással erősítjük. A találmánnyal előállítható preparátum szempontjából igen fontos a lázkeltő anyagok eltávolítása, ebből a célból az elegyet szer-10 ves ciklikus (vagy heterociklikus) savval, célszerűen benzoesavval telítjük. I. példa. Legyen a kérdéses hormon fehérjekarakterű, jelen példában inzulin. Kiindulási anyag: g/2120 1. E. nyersanyag. 15 Ebből 80 g-ot 1600 cm 3 sósavas vízben feloldunk. A pH: 3.5. Az oldatot 1200 cm3 kloroformmal keverjük el és szilárd szénsavat adunk hozzá. Az elegyet ezután megfelelő edényben acetonos szénsav ele-20 gyével lassan — 80°-ra hűtjük le. A felhabzott elegy ilyen formában kifagy. 16 órán át tartjuk ezen a hőmérsékleten, majd fölengedés után centrifugáljuk. Centrifugálás után a két fázis határfelületén levő protein 25 aggregátumot kiszűrjük, majd acetonnal mosva éterrel szárítjuk. 90%-os kitermelésben g/12.000 I. E. terméket nyerünk. A vizes fázis szulfoszalicilsavval csak erősen megzavarosodik, csapadékot már nem ad, 30 főtömegében poiiszaccharidokat tartalmaz. Inzulintartalma minimális. Mások a viszonyok abban az esetben, ha a hatóanyag hordozója nem fehérje, hanem poliszaccharid, mint pl. a chorio genadotrop 35 hormon esetében. A choriot terhes vizeletből állítják elő és a hormont a vizelet kapilláraktív anyagai az ú. n. stalagmonok tartalmazzák. Ezek kolloidok, illetőleg szemikolloidok. Diszperzitásfokuk finomabb, mint 40 a fehérjéké. Vízben jól oldódnak és részben savanyú és részben amfotér jellegűek. A stalagmonok közé tartoznak elsősorban a íehérjebomlástermékek, exiproteinsavak, az albumozák és peptonok fajtájából. A vizelet 45 nem dializálható anyagtartalmához tartoznak még a mucinok, nukleinsavak, továbbá egy N-tartalmú komplex szénhidrát. Ezek a vizeletkolloidok a kolloid arányra védőhatást fejtenek ki, az arányszám: 0.69—0.81. A 50 chorion ezen stalagmonok közül a szénhidráthoz van kötve. A rendelkezésre álló adatok szerint pl. a chorion tisztítását annak állandó cukortartalmának ellenőrzésével végzik és feltételezik, hogy a eukorrész a 55 hatóanyaghoz hozzátartozik. Ezek szerint a biológiai hatás a cukortartalomtól egyenes arányban függ. Hogy a chorion a stalagmonokhoz van kötve, ill. hogy a stalagmonok a hormon hordozói, azt legjobban bizonyítja, hogy a hormon a vizeletből habozta- 60 tási módszerrel szinte kvantitative kinyerhető. 2. p é I'd a. Kiindulási anyag: g/80.000 I. E. nyersanyag. Vízben oldható, még toxikus anyagokat tartalmaz. 2 g-ot 50 cm3 50%-os 65 - alkoholban oldunk, a pH: 9.0. 16 órán át —80°-on fagyasztjuk. Fölengedés után pH 5-re állítjuk be és acetonnal kicsapjuk. Szűrve, acetonnal mosva és éterrel kiszárítva 1.9 g—g/120.000 I. E. terméket kap- 70 tunk, tehát egyedül a hideg hatására a biológiai aktivitás emelkedett, anélkül, hogy kísérőanyagaiból valamit is eltávolítottunk volna. Ez a kísérlet szemléltetőleg bizonyítja a chorion hormon enzimatikus jellegét. 75 Ebben az esetben is, akárcsak az enzimeknél, aktiválás történt, a dezaggregáció következtében új aktív csoportok váltak szabaddá. 2. b. p é 1 d a. Ha a fenti kísérletet olyan 80 50 % -os alkohollal végezzük el, mely benzoesavra telített, úgy ebben az esetben a fölengedés után kapott termék, vízben már nem oldódik fel teljesen. A terméket pH 7,5-vízzel extrahálva, majd az extraktumot 85 kicsapva, 90%-os kitermelésben g/169.000 I. E. terméket nyerünk. Az oldhatatlan rész főleg fehérjebomlástermékből áll. Ezzel szemben a vizes kivonat, mely a hatóanyagot tartalmazza, poliszaccharidokbóláll és 90 lázkeltő anyagoktól teljesen mentes. Ez a frakció kéntartalmú. A hormontartalmú frakció oxidációs-redukciós tulajdonságait polarografikusan csepegő higanyelektróddal vizsgálva, kiderült, hogy a'tiol- vagy dí» 95 szulfid csoportok száma a hidegeffektus ha' tására emelkedett. Valószínűleg szoros összefüggés van a hormon aktivitása és a szabad tiol- vagy diszulfid csoportok között. Ezek az új csoportok a hidegeffektus 100 hatására fellépő dezaggregáció következtében válnak kimutathatóvá. A lázkeltő anyagoktól való mentesítésnek a penicillin előállításánál legnagyobb jelentősége van. Ez a legújabban nagy je- 105 lentőségre tett gyógyszer egy penészgomba; a penicillium notatum anyagcsere terméke. A penicillin izolálása gomba kultúrfolyadékából történik. Előállítása nagyfokú hőérzékenysége következtében Jparilag igen ne: no liéz. A kriolitikus -• módszerrel történő felkoncentráláshoz a penicillin termelését cél -szerűleg az ú. n. „bran culture" módszerrel végezzük. Ennél a módszernél,' mitit neve is mutatja, a penészgombakultúrát nedves sté- 115 ril keményítőpépes táptalajon tenyésztjük. ; >
