135166. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oldható teljes antigének kíméletes előállítására mikroorganizmusokból
2 135166. ció következtében beáliló zavaró beiolyasokat is kiküszöbölhetjük. Előnyösnek bizonyult továbbá, ha az oldott 'baktériumantigéneket az oldószerkeve-5 rékből leválasztjuk és fiziológiai környezetbe visszük át. Ezt különösen kíméletes módon akként érhetjük el, hogy a baktériumoildiathoz szerves, vízben oldódó folyadékokat pl. etilalkoholt vagy acetont, vagy 10 semleges sókat, pl. am»món£umszulf átot adagolunk oly mennyiségben, ihogy a kicsapást határt majdnem, elérjük, de túl nem lépjük és ezután szénsav bevezetésével vagy csekély mennyiségű sav beadagolásával a 15 teljes antigént kicsapjuk. Az ekkor keletkező durván pelyhes, gyakran hosszú szálakká összecsomósodott csapadékokat röpítessél elkülönítjük és fiziológiai oldószerekkel 7—8 pH-értéken oldatba vesszük. Az 20 oldott anyagok töménységétől függően opalizáló vagy víztiszta oldatokat kapunk, melyek képesek arra, hogy parenterális bevitel útján a teljes 'baktériumokkal szembeni különleges antitesteket létesítsenek. 25 Ekként például már néhány miülgramm vagy gyakran a mlilligramm törtrésznyi mennyiségű oldott teljes antigénnel sikerül a teljes baktériumokkal szemben agglutáló antitesteket létesíteni, melyek magában az 30 immunszérumban 1 : 10000 hígításban ismét világosan .kimutathatók. Az elölt teljes kultúrákkal való kezeléssel szemben iá találmány szerinti eljárással előállított oldható baktériumantigéneknek az 35 az előnyük, hogy különösen intravénás adagolás esetében sokkal jobban elvfeelhetők, azonban az oldott teljes antigének a patogén im'ikroofrganizimueokkial szembeni immunizáláshoz többnyire alkalmazott intna-40 muszkuláris vagy szubkutan adagolásnál is jelentős haladást jelentenek, mert azokat megfelelő hordozóanyagokhoz pl aluminiumhidroxidhoz köthetjük és ezzel sokkal jobb raktározó hatást érhetünk el, mint 45 amilyen előlit baktériumtestekkel való megfelelő immunizálásnál elérhető. Az oldott teljes lantiigének diagnosztikai célokra is alkalmazhatók, imivei az immunszérumokkal! mind különleges, precipitin-50 reakciókat, ítnindpedig korapletnentkötési reakciókat adunk. Oly mikroorganizmusok feldolgozásánál, melyek folyékony táptalajon való tenyésztésük közben törzsanyaguk összetevőit ön-55 kéntesen a tápfolyadéknak adják le, teljes antigéneket olymódon állíthatunk elő, hogy a mikroorganizmusokat először bizonyos ideig folyékony táptalajon tenyésztjük, ezután a sejtantigén oldatát a fent ismertetett módon állítjuk elő és ehhez az oldathoz w> a szűrt tápfolyadékot mint olyat, vagy megfelelően feldolgozva adagoljuk. 1. példa. ' Ascites-agiaron tenyésztett egynapos gonokokkuszkultúrát fiziológiai konyhiasóol-,65 dattal leöblítünk, majd mossuk és 5 C° hőmérsékletre hűtjük. Ha az így kapott szuszpenzió 10 cm3 -nyi mennyiségéhez 2,7% nonilalkohol és 10% polietilénglikol-rizinolsavészter jéghideg tiszta oldatának 200 70 cm'-nyi ' mennyiségét adagoljuk, néhány perc múlva a baktériumok teljesen feloldódnak. A kapott oldalthoz 150 cm3 acetont adunk, miiközben az erősen opaüizálóvá válik, azonban csapadék nem. keletkezik. Ha 75 mármost néhány csepp ecetsavval mintegy 5,0 pH-ra rnegsavanyítjuk, dús mennyiségű, színtelen, szálhúzó csapadékot kapunk, melyet röpítesse! elválasztunk, majd vízzel, NaCI-al és kevés hígított nátronlúggal so 7,0 pH-értékű vérizoton oüdiattá alakítunk át. A kapott készítmény 0,25% oldott baktériumösszetevőket tartalmaz. Erős precipitin-reakciót ad oly kísérleti' állatok szérumával, melyek teljes baktériumokkal vagy «5 pedig magával az oldott baktériumkészítménnyel lettek immunizátva. 2, példa. Agár-táptalajról leöblített koli- vagy tifuszbacilusokboz az 1. példában meg- 90 adott módon 2% CHCVnak 10% poliietilénglikol-oleiléterben való oldatát adagoljuk és a pH-értéket néhány csepp hígított alkáliéval vagy kevés szekunder káliumfoszfáttal 8,0-ra állítjuk be. Az elegyet 24 órár g 95 jégszekrényben állni hagyjuk. Az oldott fciaktériumösszetevőt ezután röpítessél elkülönítjük és 4 /s térfogaitrész alkoholt vagy 7s térfogatrész telített ammoniumszulfátoldatot adunk hozzá. Ez az adalék az anyagot 100 nem csapja ki. Ha ezután az oldatba szénsavat vezetünk, 6,9 pH-értéknél durván pelyhes csapadék keletkezik, melyet röpítés után az 1. példában megadott módon fiziológiai oldatban viszünk át. A nem oldott 105 taaktériumrészt az oldószerkeverékkel újból kezelhetjük és a 'már most oldatba ment részeket megfelelő módon feldolgozhatjuk. A kapott' oldott teljes antigének állatkísérleteknél jó eílviselhetőség mellett igen no erős antigénhatást mutatnak. Házinyulaknál több napon át folytatott, összesen 3,5 ,„ milligramm oldott titfuszantigénneí végzett intravénás injekciókkal a szérumnak 1 : 10000 fölötti agglutinációs titerét idéz/i U5
