115947. lajstromszámú szabadalom • Eljárás élő szervezetekben meghatározott idegen proteinek bontására specifikusan alkalmas hatóanyagok előállítására
proteinjére kifejteti hatását megvizsgálandó, több kísérlet végeztetett: Mindig friss disznólencsét használtunk, melyekből 4 mm élhosszú kockákat vág-5 tunk ki és kémcsövekbe egy négy kockát helyeztünk, Mindegyik kémcsőbe egyforma mennyiségű, vagy megszabott mennyiségi! enzimtartalmú folyadékot töltöllünk s 5 cm3 pufferoldat adagolásával 10 az oldatot megszabod pH értékre állítottuk be. Ezután 37°-on 18 óráig hagytuk az emésztési végbemenni s ezután az egyes csövekben végbement emésztés mérvéi megállapítottuk. 15 E kísérletek eredményekén L kilűnl. hogy a lencseproteinek megemésztése az enzimek hatására ment végbe. Az enzimek nem könnyen dializálódnak s ennek folytán alig tételezhető fel. hogy könnyen 20 tudnának áthatolni a lencseburkon keresztül a lencse belsejébe. Ennek folytán a ka-Laraktán lencseanyagnak a burkon belül való meglágyílása szükségképen hosszadalmas folyamat, amil a klinikai gyakorlat is 25 igazol. Megállapítást nyert továbbá, hogy löbb proteolitos mikroorganizmus, akár egyenként. akár társasan alkalmazva, prolein elbontására képes, ha olyan tápanyagon 30 tenyésztjük, amely ezt a proteint tartalmazza. de a növekedés táplálására alkalmas más proteint nem. A kísérleteknél BHSubtilis-t használtunk, mint egyik leghatékonyabbját azoknak a proteolitos 35 mikroorganizmusoknak, melyek tenyészetükben a protein hasításából eredő aminosavakat felhasználni képesek. Ehelyett természetesen más mikroorganizmusokat is lehet használni egyedül vagy kombináltan. 40 Miközben a mikroorganizmusok a kultúrközegen tenyésznek, olyan anyagot termelnék, mely a közegben lévő proleint oldja, folyósítja, megemészti, szétbontja, módosítja vagy egyébként megváltoztat ja s a 45 proteint aminosavakká vagy más ártalmatlan biokémiai termékekké alakítja. A tenyészetes táptalajból ezt az eddig ismeretlen hatóanyagot biokémiai módszerekkel elkülönítjük, sterillé és toxikus pro-50 temektől mentessé tesszük, ami által az emberi testben való alkalmazása lehetőivé válik. Az új: hatóanyag elkülönítését lehetővé teszi az a tény, hogy ez az eddig ismeretlen proteinszeríí hatóanyag vízben 55 oldhatlan, de híg sóoldatban oldható és különböző pH értékeknél igen különbözőképen viselkedik. Kitűni lovábbá, hogy az ilv módon termelt halóanyag bizonyos mérvben specifikus. Ez a specifikusság valószínűleg 60 attól a proleinmolekula-összetételtől és áltól a különleges aminosav-lánctól függ. amelyből az új: hatóanyag keletkezeit. Ha ez a hatóanyag olyan tenyészetből ered, mély csak egy bizonyos típusú proteint 65 tartalmazóit, akkor rendszerint ez a hatóanyag csak az ugyanilyen molekuláris szerkezetű és aminosav-.összetételű proteineket tudja megemészteni. Ha a tápközegben a kristály lencse pro- 70 telpjét egyéb szövetektől megtisztított, jóvagy rosszindulatú bármityen újképződmény sajátos proteinjével helyettesítjük, a tenyészetből olyan hatóanyagot különíthetünk el, mely ezt a sajátos proleint el- 75 bontja, akármilyen alakban vagy helyen legyen is az emberi testben. Ha ezt a hatóanyagot a véráramba bevezetjük, az lijképződmény visszafejlődésének kell megindulnia. 80 Ily módon lehál olyan specifikus antigén halóanyagokat ismertünk meg. melyek azoknak a betegségieknek gyógykezelésére alkalmasak, melyeknél idegen szövetsejteknek vagy idegen proteinnek az emberi 85 leslben való képződéséi tételezzük fel. A táptalajból elkülönített hatóanyagot az emberi testbe vagy lokálisan, vagy az általános keringésbe fecskendezhetjük be. oly betegség gyógykezelésére, melynek pa- 90 lologikus proteinjeit adagoltuk ahhoz a táptalajhoz, amelyben az új hatóanyagot termeltük. Példaképen kalarakfa gyógykezelésére specifikusan alkalmas hatóanyagot követ- 95 kező lépésekben állíthatunk elő: 1. Disznó kristálylencséi megőrlésével táptalajt készítünk. 2. Ebbe a táptalajba alkalmas proteolitos és célszerűen nem patogén mikro- 100 organizmusokat, pl. B. subtiMis-t vagy hislolylicus-l vagy prodigiosa-t vagyproteus-t oltunk he. 3. A hőmérsékel 37.f)( l -on tartjuk. 4. A tenyésztést a gyengébb vagy erő- 105 sebb beollás mérvétől függően különböző Ideig folytatjuk. melv rendszerint több mint 24 óra. ' 5. A hatóanyagot a tenyészetből pl. centrifugál ássál, szűréssel, savanyítással vagy 110 a 1 kai i z á I á s s a 1 elkülönítjük. 6. A halóanyag hatékonyságát úgy vizsgáljuk meg, hogy megszabott mennyiségű hatóanyagba megszabott mennyiségű friss proteint (a jelen esetben lencseőrleményt) 115 keverünk be s megszabott időszak után a végbement emésztés mérvét megállapítjuk. Fibroma vagy egyéb neoplazma kezeié-
