Kelemen Imola (szerk.): A Csíki Székely Múzeum Évkönyve 6. (Csíkszereda, 2010)
Természettudományok - Laslo Éva–György Éva–Lányi Szabolcs: Növényi tápanyag mobilizáló baktériumok izolálása és jellemzése
NÖVÉNYI TÁP ANYA G-MOBILIZÁL Ó BAKTÉRIUMOK... szolubilizáló képességének vizsgálata, valamint a legalkalmasabb törzsek szelektálása mikrobiális oltóanyag előállítása érdekében. ■ Anyag és módszer Rhizobaktériumok izolálása A baktériumok izolálása különféle hüvelyes növények: a szegesborsó (Lathyrus sativus L.), a korcshere (Trifolium hybridum L), a szennyes bükköny (Vicia grandiflora Scop.), az erdei csillagfürt (Lupinus polyphyllus Lindl.) és a kerti paszuly (Phaseolus vulgaris L.) gyökérgümőiből és rizoszférájából történt. A gümőket 6%-os nátrium-hipokloridos oldatban fertőtlenítettük, miután steril vízben átmostuk. Ezt követően mozsárba roncsoltuk és 9 ml steril fiziológiás oldatban feloldottuk. A kapott szuszpenzióból 0,1 ml-t leoltottunk szélesztéssel élősztőkivonat-mannitolos szelektív tápagarra (YEM táptalaj, összetevők 1000ml-re: 10 g mannitol, 0,5 gK2HP04,0,2 gMgSC>4 7H20,0,1 gNaCl, 1 g élesztőkivonat, 0,2 g CaCb ‘2H20, 0,01 g FeCl3‘ 6H2O, 20 g agar, 25 pg/ ml kék bromtimol, pH 6.7-7.0.). A talajmintákból hígítási sort készítettünk, ezt követően az alapszuszpenzióból és az egyes hígításokból szintén leoltottunk szélesztéssel 0,1 ml-t YEM táptalajra, majd 48 órát 28 °C-on inkubáltuk. A kifejlődött jellegzetes baktérium telepekből tiszta tenyészeteket készítettünk, melyeket YMA ferde tápagaron (összetevők 1000 ml-re: 10 g mannitol, 0,5 g K2HPO4, 0,2 g MgS04-7H20, 0,4 g élesztő kivonat, 15 g agar.) tartottuk fenn. Sejtmorfológiai és biokémiai vizsgálatok A baktérium törzseket sejtmorfológiai (Gram-festés és spórák jelenlétének kimutatása) és biokémiai vizsgálatoknak (glükóz-, laktóz felhasználás, oxidáz próba, nitrát redukció, zselatinbontó képesség valamint oxigénigény vizsgálat) vetettük alá.18 Szervetlen foszfát szolubilizálásának kimutatása A YMA tápagaron nevelt 24 órás 28 °C-on inkubált, vizsgálni kívánt törzseket pontoltással leoltottuk Ca3(P04)2-ot tartalmazó Pikovskaya tápagar lemezekre (összetevők 1000 ml-re: élesztő kivonat 0,5 g, glükóz 10 g, Ca3(PÜ4)2 5 g, (NH4)2S04, 0,5 g, KC1 0,2 g, MgS04 0,1 g, MnSC>4 0,0001 g, FeS04 0,0001 g). Pozitív eredmény esetén a kifejlődött baktérium telep körül a tápagar kivilágosodik, vagyis a táptalaj azon részéből kioldódik a Ca3(P04)2-át.19 ■ Eredmények és következtetések Munkánk során 33 baktérium törzset izoláltunk a szegesborsó (Lathyrus sativus L.), a korcshere (Trifolium hybridum L.), a szennyes bükköny (Vicia grandiflora Scop.), erdei csillagfürt (Lupinus polyphyllus Lindl.) valamint a kerti paszuly (Phaseolus vulgáris L.) gümőiből és rizoszférájából. A telep- és sejtmorfológiai, valamint a biokémiai vizsgálatok eredményei lényeges információt nyújtanak a baktériumok azonosítása során. A rhizobium telepek brómtimolkéket tartalmazó élesztő mannitolos szelektív táptalajon kör alakú, nyálkát képző, sárgás- fehéres, ívelt elevációjú valamint ép szélű telepeket képeznek.20 Ennek megfelelő telepeket vettünk fel a kutatásunk során. A rhizobiumok Gram-negatív, pálcika alakú, nem spóraképző sejtek, szén- és energiaforrásként szénhidrátokat használnak, a laktóz kivételével. Az általunk vizsgált izolátumok közül nyolc kivételével Gram-negatívak voltak, és csak egy törzs spóraképző. 18 DUNCA ET AL. 2004, 144-162. 19 SRIDEVI ET AL. 2009, 98-102. 20 ALBERTON ET AL. 2006, 1298-1307. 503
