A Magyar Hidrológiai Társaság XXIV. Országos Vándorgyűlése I. kötet (Pécs, 2006. július 5-6.)

2. szekció: A VÍZIKÖZMŰVEK HELYZETE - MIKROBIOLÓGIAI JELENSÉGEK A VÍZIKÖZMŰVEKBEN - Dr. Vasdinyei Rita–Bogyóné Asztalos M.–Törökné Kozma A.: Cianobaktériumok toxintermelésének vizsgálata molekuláris módszerekkel

2. táblázat. A PCR és az RT-PCR során alkalmazott primerek Determináns Primer Szekvencia (5'-3') Termék <bp) Hivatkozás C. raciborskiif Cyl2 GGCATTCCTAGTTATATTGCCATACTA 308 Wilson et al. 2000 C. raciborskiir Cyl4 GCCCGTTTTTGTCCCTTTGCTGC 308 Wilson et al.2000 pksf M4 GAAGCTCTGGAATCCGGTAA 422 Schembri etal. 2001 pkS

r K18 CCTCGCACATAGCCATTTGC 422 Fergusson and Saint, 2003 ps, M13 GGCAAATTGTGATAGCCACGAGC 597 Schembri etal. 2001 PS

r M14 GATGGAACATCGCTCACTGGTG 597 Schembri etal. 2001 3. táblázat. A PCR-hez használt reakcióelegy összetétele Összetevők Mennyiség lOx reakció puffer 3 |xl 50 mM MgCl

2 3 nl Primer

(forward

) lHl Primer

(revers

e) U1 Templát DNS 3 |il DyNazyme EXT DNA polimeráz 1U/ |il 0,5 ni dNTP mix (10 mM mindből) 0,3 |il Nukleáz mentes H

20 18,2 |il A PCR paraméterei a következőek voltak: a bevezető egyszálúsítási szakasz 94 °C 10 perc, amelyet egy 55-ször ismétlődő ciklus követett. Ez a ciklus egy 30 másodpercig tartó 94 °C-os egyszálúsítási szakaszból, egy 30 másodperces 45 °C-os primer kötődési szakaszból és egy 1 percig tartó 72 °C-os primer hosszabbodási szakaszból állt. Ezt egy 1 percig tartó 72 °C-os végső lánchosszabbítás követett. 4. táblázat. Az RT-PCR-hez használt reakcióelegy összetétele Összetevők Mennyiség 1 Ox reakció puffer 5 ni 50 mM MgCl

2 1,5 Hl Primer

(forv>a

R|

) lul Pnmer

(reverse

) 1 Hl Templát RNS 3 Hl AMV reverz transzkriptáz lHl DyNazyme EXT DNA polimeráz 1U/ |jl 2 Hl dNTP mix (10 mM mindből) lHl RNáz mentes H

20 34,5 Hl 461