Hidrológiai Közlöny, 2015 (95. évfolyam)
2015 / 5-6. különszám - LVI. Hidrobiológus Napok előadásai
30 HIDROLÓGIAI KÖZLÖNY 2015. 95. ÉVF. 5-6. SZ. mokon Chromas Lite 2.1.1 szoftverrel (Technelysium) végeztük a hibásan értelmezett bázisok manuális korrekcióját és a primer-szekvenciák eltávolítását. A szekvenciákat EzTaxon (Kim és mtsai., 2012) adatbázis segítségével valid fajok típustörzseivel hasonlítottuk össze a törzsek azonosításának érdekében. Eredmények és értékelésük A mintavétel idejében a vízmélység 5 cm, a pH 10,2, a vezetőképesség 15,5 mS/cm volt. A vízoszlopban az a- klorofill koncentrációja 10,6 mg/L, míg az üledékfelszíni piros rétegben az a-bakterioklorofill koncentrációja 7,8 mg/L volt. Mikroszkópos vizsgálatokkal megállapítottuk, hogy a víz felszínén megfigyelhető zöldalga-virág- zást ugyanaz az Oocystis submarina okozta, amelynek egy másik kiskunsági szikes tóban, a Böddi-székben 2009-ben megfigyelt tömegprodukciója alatt az itt meg- figyelthez hasonló bíbor színű réteg alakult ki (Borsodi és mtsai., 2013). Tenyésztéses eljárással meghatároztuk a heterotróf baktériumok csíraszámát. Aerob körülmények között 19 nap inkubáció után 1,7X 106-3,5x 107 TKE (telepképző egység)/mL értékeket kaptunk; az intervallum alsó értékei a ’C’ táptalajhoz, míg a felsők az ’S’ és az R2A médiumhoz köthetők. Anaerob körülmények között 4,2 *104 és 3,6* 107 TKE/mL értékeket eredményezett a 19 nap inkubáció a ’C’ és ’S’ médium esetében, ugyanakkor az R2A táptalajon semmi nem nőtt ki. A háromféle táptalajról tiszta tenyészet formájában 46 aerob törzset sikerült fenntartani és azonosítani. Az anaerob törzsek azonosítása lassú növekedésük miatt még feldolgozás alatt áll. 16S rDNS szekvencia alapján a törzsek a Proteobacteria (25 db) illetve a Bacteroidetes (21 db) phylumba tartoznak, a legközelebbi tenyésztésbe vont fajok típustörzseivel 92,7-99,9%-os szekvenciabeli egyezést mutattak (1. táblázat). Új generációs szekvenálással 3131 szekvenciát nyertünk, amelyek 97 % feletti szekvencia-hasonlóság szerint (Tindall és mtsai., 2010) 143 operatív taxonómiai egységet (OTU-t) alkottak, ami a mintában előforduló baktériumfajok számának feleltethető meg. Feltűnő volt az anaerob bíbor kénbaktérium, az Ectothiorhodospira nemzetség 32,6 %-os részaránya (1. ábra), amelyhez összesen 3 OTU tartozott, ami három e nemzetségbe tartozó különböző faj jelenlétét valószínűsíti. Jól látszik még továbbá a tenyésztéses eljárással azonosított nemzetségekkel való nagyarányú egyezés. A törzseink között is megtalálható Rhodobaca nemzetséget 795 szekvenciával kettő OTU, míg a Loktanella és a Porphyrobacter-1 97, illetve 80 szekvenciával egy-egy OTU képviselte, a 71 A- quiflexum szekvencia pedig 3 OTU-hoz tartozott. Megjegyzendő, hogy az előbbi három nemzetség tagjai bizonyos körülmények között fotoheterotróf növekedésre is képesek, míg az utóbbi csoport az obiigát heterotróf a- nyagcserét folytatók közé tartozik (Fuerst és mtsai., 1993; Brettar és mtsai., 2004; Van Trappen és mtsai., 2004; Madigan és mtsai., 2010). A tenyésztéses és tenyésztéstől független vizsgálat e- redménye közötti átfedés mértéke meglepő, hiszen sok e- setben egy-egy mintából a teljes közösség csupán 0,01-1 %-a vonható tenyésztésbe (Puspita és mtsai., 2012), nekünk viszont sikerült az egyik domináns nemzetséget (Rhodobaca), valamint a gyakoribb csoportok közül többet (Aquiflexum, Loktanella és Porphyrobacter) is kitenyésztenünk, ami az alkalmazott egyedi táptalajok hatékonyságát igazolja. Továbbá mindenképpen megjegyzendő, hogy bár tenyésztettünk Nitrincola, Alkalimonas, Pseudomonas és Vibrio nemzetségek alkalikus vizekből leírt fajainak szekvenciáival nagyfokú hasonlóságot mutató baktériumokat, ezeket az új generációs szekvenálással nem sikerült kimutatnunk. Ennek oka az lehetett, hogy valószínűleg nagyon kicsi, elhanyagolható mennyiségben lehettek jelen a közösségben. Más szikes tavakból viszont sikerült ezeket a nemzetségeket is az itt alkalmazott újgenerációs DNS-szekvenálási módszerrel kimutatni (Szabó A., Korponai K. és Felföldi T, publikálatlan eredmények). 1. táblázat A bíbor színű rétegből izolált baktériumtörzsek azonosításának eredménye (legközelebbi rokon fajok típustörzseihez való hasonlóságuk) a 16S rDNS szekvencia elemzése alapján phylum classis genus törzsek száma (db) hasonlóság (%) .2 o O 03 X O a-proteobacteria Porphyrobacter 1 99,0 % Loktanella 4 99,3-99,7 % Roseicitreum 1 99,6 % Roseinatronobacter i 97,7 % Rhodobaca 2 97,6-97,7 % Paracoccus 1 96,1 % 0> o .2 Halomonas 3 98,4-98,8 % Q* 4) O Nitrincola 2 97,3-98,4 % X o Pseudomonas 3 94,7-98,4 % o Vibrio 3 99,7 % Alkalimonas 4 99,9 % a> .2 Belliella 9 93,0-99,8 % 12 k? X Aquiflexum 9 93,0-93,7 % o> o Fontibacter 2 92,7 % 03 CQ U Indibacter 1 93,5 % 1. ábra. A bíbor színű réteg bakteriális közösségének összetétele az újgenerációs szekvenálás eredményei alapján (Az ábrán csak az 1%-nál nagyobb arányban jelen lévő nemzetségeket vagy azzal ekvivalens tenyésztésbe nem vont csoportokat ábrázoltuk külön kategóriaként.) Összefoglalás Molekuláris biológiai vizsgálatainkkal megállapítottuk, hogy a bíbor színű réteget nem egy baktérium homogén monokultúrája, hanem egy viszonylag komplex baktériumközösség alkotta. A baktériumközösségen belül két pirosas színű nemzetség (az Ectothiorhodospira és a Rhodobaca) együttesen kiemelkedő, 58%-os részarányt képviselt. A domináns taxonokat jelentős mennyi
