Hidrológiai Közlöny 1997 (77. évfolyam)
71 Rutinteszt elővizsgálatok cianobaktérium (kékalga) toxinok detektálására Töröknc Kozma Andrea, Nagy Gábor "Johan Béla" Országos Közegészségügyi Intézet Állatorvostudományi Egyetem Budapest Előzmények Az eutrofizáció lassan világproblémává válik s ez alól hazai felszíni vizeink sem kivételek. Az cutrofizáció cgyik káros hatása a cianobaktériumok (régi néven kékalgák) tömeges elszaporodása különösen állóvizeinkben. Ma már köztudott, hogy a cianobaktériumok több, mint 50 genusából 19, ezen belül 41 faj bizonyult toxintermclőnck. Az USA-ban, Kínában, Ausztráliában súlyos mérgezési tünetek májkárosodások), valamint máj tumorok gyakoriságának megnövekedése jelezték a veszélyt az olyan ivóvizet fogyasztó lakosság körében, akiknek vízellátása tározókból víztisztítási technológiával nyert ivóvízzel történt, s a tározókban rendszeresen toxikus vízvirágzások fordulnak elő. Az OKI-ban ez irányú vizsga-' latok szintén 1983-ban kezdődtek cl, felmérések szerint 79 vízminta vizsgálata során 50 esetben tapasztaltunk cianobaktérium lömegprodukciót, melyből 33 minta bizonyult toxikusnak intraperitoncális cgérteszttel. Hazánk egyes régióiban a lakosság vízellátását kizárólag, illetve igen nagy százalékban a felszíni vízből víztisztítási technológiával nyert ivóvíz biztosítja. Ilyen régiók a Balaton környéke, valamint az Északi-középhegység mesterséges víztározói, így Komravölgy, Lázbérc, Hasznos stb. így közegészségügyi szempontból döntő jelentőségű, hogy mind felszíni vizeink, mind ivóvizeink toxikológiai momtoringja biztosított legyen. Anyag és módszer Vizsgálatainkat kékalga toxinkimutatásra eddig a világgyakorlatban elfogadott intraperitoneális egértcszttel végeztük, azonban a rutinszerű ellenőrzésre ez a módszer nem alkalmas magas költség és szakember igénye miatt. Olyan módszerek után kutattunk, melyek pl. vízműlaboratóriumok gyakorlatában is kivitelezhclőck. A következőkben két kidolgozás alatt levő gyorsteszt kivitelezését ismertetném : 1. csíranövény teszt 2. Thamnotox teszt 1. A Microcystis aeruginosa toxinjait Borbély György csíranövénytesztic\ kimutatta tiszta toxinra 3 pg/mL LC 5 0 értékkel. A teszt eredményeit 5-8 nap múlva értékelte a kifejlődő Sinapsis alba (fehér mustár) növénykék hosszának megmérésével kontrollhoz viszonyítva. Ezt a módszert egyszerűsítve, valamint az inkubálási időt csökkentve fejlesztettük ki a következő módszert. Megfigyelések azt bizonyították, hogy a toxin a gyökérnövekedést ugyanolyan mértékben, vagy több esetben jobban gátolta, mint a növényke kifejlődését. így a toxinhatás delektálását 72 h-ra tudtuk csökkenteni, mivel csak a gyökérnövekedést figyeltük. 5 cm átmérőjű petri-csészékbe l-l itatóspapírkarikát helyeztünk. Szárítószekrényben 105° C-on sterilizáltuk 2 h hosszat. Minden minta vizsgálatát 3-3 párhuzamosban végeztük. A minták 11 mL-ével megnedvesítettük az itatóspapírokat, majd ráhelyeztünk 5-5 mustármagot egyenletes elrendezésben. A minták előkészítését a következők szerint végeztük. A felszíni vízben planktonhálóval vízvirágzás idején gyűjtött biomasszát liofilizáltuk, majd különböző mennyiségeket hígító vízbe mérve 1 éjszakán át inkubáltuk szobahőmérsékleten. Centrifugáltuk, majd a felülúszót mintaként használtuk. Hígítóvízként, valamint kontrollként Allén tápoldatot használtunk. 2. A másik gyors tesztmódszer, amelyről bc szeretnék számolni Dr. Pcrsoone által kifejlesztett toxikológiai kit módszer, a Thamnotox F kit, mely a Thamnoccphalus platyurus kisrákot használja tcsztál latként. A tesztmódszer lényege, hogy a tesztállatokat ciszta formában lehet tárolni hűtőszekrényben 1/2 évig, így a tesztállatok tenyésztése, fenntartása nem jelent gondot a tesztet végző számára. A teszt megkezdése előtt 24 h-val standardizált művizzel kell inkubálni a cisztákat, melyekből azonos korú tesztállatok kelnek ki. A tesztet mikrotiter lemezen, 1 - 1 mL tesztoldattal végezzük. így a teszt kivitelezése nem helyigényes, a vizsgálatok eredményeit 3 párhuzamos átlagaként értékeljük. A százalékos pusztulást a művizes kontrollhoz viszonyítva adjuk meg. A módszer alkalmas LC 50 meghatározására vagy konkrét koncentrációk bevizsgálására. Vizsgálati eredményeinket HPLC-s analízissel egészítettük ki. 3. Folyadékkromatográfiás (HPLC) vizsgálatok Microcystin standardok (Microcystin YR, Microcystin LR, Microcystin RR) segítségével azonosítottuk a különféle Microcystis törzsek toxintartalmát. Folyadékkromatográfiás körülmények: Folyadékkromatográf. Hewlett Packard 1090 A Állófázis: Lichrosorb RP 18,5pm, 200x4,6 mm Mozgófázis: 70 tf% metanol, 30 tí% 0,05 %-os trifluorecetsav Mozgófázis áramlási sebessége: 0,70 cm 3/min Detektálási hullámhossz: 238 nm Injektált mintamennyiség. 50 pL Eredmények és megvitatásuk A fent leírt csíranövény teszttel végzett vizsgálatok eredményeit az 1. táblázatban foglaltuk össze. Az 1. táblázatból láthatjuk, hogy az intraperitoneális egér-tesztben különböző toxicitást mutató mintákat használva a csíranövénytesztben, jó illeszkedést kaptunk a százalékos gyökérnövekedés értékekben.
