Fogorvosi szemle, 2003 (96. évfolyam, 1-6. szám)
2003-04-01 / 2. szám
62 FOGORVOSI SZEMLE 96. évf. 2. sz. 2003. Anyag és módszer Organizmusok: két Candida albicans törzset vizsgáltunk, a C. albicans FR és C. albicans ATCC 38247 törzseket. A C. albicans FR törzs egy fluconazol-rezisztens mutáns laboratóriumi törzs [6]. Mindkét törzset SDA ferde táptalajon tartottuk fenn, 4°C-on. Vegyszerek: Sabouraud dextróz agart (SDA) és mikológiái pepton tápközeg az Oxoid (Basingstoke, Hampshire, Anglia) cégtől származott. Élesztőkivonatot a Difco Laboratories (Detroit, Michigan, USA) szereztünk be. Minden általunk használt vegyszer analitikai tisztaságú volt. Szaporodási vizsgálatok: C. albicans sejteket előinkubáltunk 220 ml térfogatú, 1% élesztőkivonatot, 2,5% mikológiái peptont és 2,5% glükózt tartalmazó YPG tápfolyadékban 18 órán át, 30°C-on. A sejteket alkálifémek (0,5-2 mól/l NaCI, 0,5-2 mól/l KCI, 0,0625-0,5 mól/l LiCI) megfelelő koncentrációját tartalmazó, 3 ml térfogatú YPG tápfolyadékban vettük fel olyan denzitásban, hogy 0,1 abszorbciós értéket kapjunk (^=600 nm). A kultúrákat 30°C-on, 12 órán át inkubáltuk, és az optikai denzitást 600 nm hullámhosszon mértük. Csíratömlő-képződés és plasztik felszínekhez történő tapadás vizsgálata: a C. albicans törzseket NaCI (1,5 mól/l), KCI (2 mól/l) vagy LiCI (0,25 mól/l) alkálifémkloridokkal kiegészített YPG tápfolyadékban tenyésztettük 37 °C-on, 18 órán át. Az alkálifémekkel történt előinkubálást követően a sejteket háromszor mostuk, majd fogászati akrilát-felszínekhez való tapadási képességüket, valamint csíratömlő-képződésüket a korábban leírt módszerek szerint vizsgáltuk [6]. Sejtfelszíni hidrofóbicitás vizsgálata: a sejtfelszíni hidrofóbicitásnak alkálifémekkel történő előinkubálást követő változását módosított eljárásával mértük. [20], A sejteket NaCI (1,5 mól/l), KCI (2 mól/l) és LiCI (0,25 mól/l) alkálifém-kloridokkal kiegészített YPG tápfolyadékban tenyésztettük 37 °C-on, 18 órán át. A sejteket PUM-pufferben (0,097 mól/l K2HP04, 0,053 mól/l KH2P04, 0,03 mól/l urea, 0,4 mmól/l MgS04*7H20 pH=7,1 ) mostuk, majd a sejtszuszpenziók (5x107 sejt/ml) 1,5 ml-éhez különböző térfogatnyi (0-0,5 ml) nhexadekánt adtunk. Tíz percen át, 30 °C-on történő inkubálást követően az elegyeket 120 másodpercig azonos intenzitással rázattuk. Tizenöt percen át hagytuk, hogy a szénhidrogén-fázis teljesen felszálljon, majd a vizes fázist Pasteur-pipettával óvatosan leszívtuk, és 1 ml térfogatú küvettába mértük. A vizes fázis fényelnyelésének 600 nm-en történő csökkenését fogadtuk el a sejtfelszíni hidrofóbicitás mértékeként. Statisztikai analízis: minden kísérleti adat 3-6, egymástól független mérés átlagának az eredménye. Az analitikai eljárások reprodukálhatóságát standard deviáció (S. D.) számításával becsültük. A statisztikai szignifikanciát Student t-vizsgálattal számoltuk ki. Eredmények és megbeszélés A két törzs növekedésének magas nátrium-, kálium- és litium-koncentrációk jelenlétében mutatott gátlását mutatja az 1. táblázat. Mindkét törzs növekedését koncentrációtól függő módon gátolta mindhárom alkálifém. Adott nátrium-, kálium- vagy litium-koncentráció gátló hatása a két törzs esetében hasonló volt. Amint az várható volt, a három alkálifém közül a litium mutatta a legerősebb gátló hatást a C. albicans növekedésére. A litium sejt-toxicitása szakirodalomból ismert tény, és az az RNS- anyagcsere enzimeinek a gátlásának és/vagy energetikai megszorításoknak a következménye [4,17], A további kísérleteink során olyan nátrium-, kálium- vagy litiumkoncentrációkat alkalmaztunk, amelyek körülbelül 35-40% gátlást eredményeztek. Ennek megfelelően, a germináció, adhézió és sejtfelszíni hidrofóbicitás vizsgálatához a Cand/'c/a-sejteket 1,5 mól/l NaCI, 2 mól/l KCI és 0,25 mól/l LiCI jelenlétében preinkubáltuk. Bőr- és nyálkahártya-fertőzések, valamint intravénás fertőzést okozó disszeminált candidiasis modelljeiben kimutatták, hogy a csíratömlők hozzájárulnak a virulenciához [13, 22], A 2. táblázat mutatja, hogy az alkálifémekkel történt előinkubálás szignifikáns mértékben csökkenti a sejtek csírázási képességét. Ez a gátló hatás a két vizsgált Candida-törzs esetében eltérőnek bizonyult. Az FR- törzs esetében a csíratömlők számának szignifikáns (P<0,1%) csökkenését észleltük, még 3 órával a csíraképződést követően is. Az ATCC38247 törzs esetében 1. táblázat NaCI, KCI és LiCI alkálifémek hatása C. albicans FR és ATCC 38247 törzsek szaporodására Gátló koncentráció (%) NaCI FR ATCC 38246 KCI FR ATCC 38246 LiCI FR ATCC 38246 0.5M 16.5±2.5 8.9±1.1 0.5M 13.7±2.0 9.5±1.5 0.0625M 13.1 ±2.0 28.5±4.1 1.0M 29.6±4.1 19.4±3.8 1.0M 22.6±3.3 22.7±3.1 0.125M 27.9±4.0 31.8±4.5 1.5M 37.8±5.5 34.9±4.9 1.5M 29.8±4.8 27.3±4.5 0.25M 44.3±8.1 45.6±7.9 2.0M 49.3±9.5 44.8±8.3 2.0M 34.3±4.2 36.9±4.0 0.5M 72.9±10.0 71.3±7.5
