181539. lajstromszámú szabadalom • Reagens lipázmeghatározáshoz és eljárás ennek előállítására
•%* •i (19) HU MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS (11) 181539 É5 Bejelentés napja: (22) 1980. II. 4. (21) (249/80) Nemzetközi osztályozás: (51) NSZOj _£ 12 O 1/44; Elsőbbsége: (32) 1979. II. 5. (31) (P 29 04 305.8) (33) Német Szövetségi Köztársaság G 01 N 33/48 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: (42) 1982. VIII. 30. Megjelent: (45) 1986. IV. 30. \ V &2faadE;mi Tár. • 1A J n Q \ Feltalálók: Szabadalmas: (72) Dr. Neumann Ulrich vegyész, Peissenberg; Dr. Knitsch Karl-Wolfgang vegyész, (73) Boehringer Mannheim GmbH, Andechs; Dr. Ziegenhom Joachim biokémikus, Starnberg; Dr. Röder Albert vegyész, Mannheim, Seeshaupt; Dr. Zwez Wemer gyógyszerész, Seeshaupt; Kraemer Werner vegyésztech- Német Szövetségi Köztársaság nikus, Bemried; Német Szövetségi Köztársaság (54) Reagens lipázmeghatározáshoz és eljárás ennek előállítására A találmány tárgya reagens a lipáz meghatározására, különösen turbidimetriás vizsgálatban, és efjárás ennek előállítására. A hasnyálmirigy diagnosztikája szempontjából az amiláz (E. C. 3.2.1.1) és lipáz (E. C. 3.1.1.3) enzimek meghatározása 5 nagy jelentőséggel rendelkezik. Akut pankreatitis esetén néhány órán belül olykor nagyon megemelkedik mindkét szérum szintje a szérumban. Ép vesefunkció esetén azonban az amiláz kis molekulasúlya miatt gyorsabban választódik ki ismét, míg a lipáz aktivitása hosszabb ideig nagyobb marad 10 a szérumban. A pankreatitis biztos diagnózisa mindkét enzim együttes meghatározásával kapható. A lipáz elsődlegesen egy triglicerid, főleg hosszú szénláncú zsírsavakkal észteresített triglicerid, a-észterkötését hasítja diglicerid és szabad zsírsav keletkezése közben. A monogli- 15 ceriddé történő további átalakítás lényegesen lassabban megy végbe. Míg az enzimek által katalizált szokásos reakciók a vizes fázisban mennek végbe, a lipáz csak az olajcsepp/víz határfelületen hat. Ebben különbözik az észterázoktól, amelyek a 20 vizes fázisban reagálnak. A kémiai paraméterek mellett ezért a kinetikát nagymértékben befolyásolja a szubsztrát felületének minősége. Titrimetriás lipázmeghatározási módszerek ismertek. Ezek azonban a részben nehézkes kivitelezhetőség, a hosszú 25 reakcióidő és a nagy mintaszükséglet miatt csak korlátozott mértékben kerülhetnek bevezetésre a klinikai — kémiai rutinlaboratóriumban. A titrimetriás meghatározási módszerek lényeges hátrányait, nevezetesen a nagy mintaszükségletet és a hosszú inku- 30 bálási időt a turbidimetriás módszereknél elkerüljük, amelyeknél triglicerid/víz emulzió zavarosodását méljük fotometriásan. A turbidimetriás meghatározás esetében lényeges probléma viszont az állandóan közelítőleg azonos cseppnagyságú emulzió készítése. Ez különös jelentőségű, mivel a reakció kinetikáját a triglicerid cseppecskék nagysága erősen befolyásolja. A 19 61 983 sz. német szövetségi köztársaságbeli közzétételi iratból már ismeretes egy olívaolajos szárazemulzió, amely a lipázaktivitás titrimetriás meghatározására megfelelő. Ennél a szárazemulziónál azonban a trigliceridtartalom a zavarosodás fotometriás meghatározására a nagy fényabszorpció miatt nem megfelelő. A reagens azon célból történő meghígítása esetén, hogy ezt is alkalmassá tegyük a turbidimetriás kinetikus lipázmeghatározásra, a paraméterek annyira eltolódnak, hogy többé már nem nulladrendü reakciót kapunk. A találmány feladata ezért az, hogy a lipáz főleg turbidimetriás illetve nefelometriás aktivitás meghatározására olyan alkalmas reagenst biztosítson, amely száraz formájú, és vízzel való egyszerű elegyítéssel reprodukálhatóan azonos cseppnagyságú emulzióvá alakítható. A találmány egy további célja, ezenkívül egy olyan reagens biztosítása, amely a rekonstruált emulzió cseppnagyságát a szárazreagens kvantitatív összetételével szabályozza, és messzemenően független a száraz reagens előállítására használt trigliceridemulziótól. Ezáltal elkerülhető, hogy a triglicerid-emulziót a felhasználónak magának kelljen elkészíteni közvetlenül a vizsgálat elvégzése előtt. Mivel a szubsztrátfelület minősége nagymértékben meghatározza az enzim aktivitását [Clin. Chem. 23,522—53 (1977)], kielégítő eredményekhez mindig 181539
