181104. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 41200 RP jelű, immunitást fokozó anyag előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 181104 Bejelentés napja: 1980. IV. 18 (948/80) Franciaország-beli elsőbbsége: 1979. IV. 18. (79 09743) Nemzetközi osztályozás: NSZ03: C 07 G 3/00. __ C 07 G 7/00, C 12 R 1/265 ORSZÁGOS találmányi Közzététel napja: 1982. VIII. 30. \. Szabadalmi Tar. • ^ V'^-»ZVt-AJOON>' HIVATAL Megjelent: 1984. XII. 31. Feltalálók: Szabadalmas: Florent Jean mezőgazdasági mérnök, Boulogne-Billancourt, Lunel Jean mező- Rhone-Poulenc Industries, gazdasági mérnök, Párizs, Mancy Denise farmakológus, Charenton, Vuillemin Párizs, Franciaország Bernard biokémikus, Yerres, Franciaország Eljárás a 41 200 RP jelű, immunitást fokozó anyag előállítására 1 A találmány tárgya eljárás a Micrococcus sedogenes M 78 elnevezésű új mikroorganizmus tenyészetéből elkülönített sejtekből kinyerhető, és 41 200 RP számmal jelölt, biológiailag hatásos új anyag, valamint az ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. A találmány szerinti 41 200 RP anyag a Micrococcus sedogenes M 78 törzs izolált sejtjeinek lizozimmel való kezelése, a szennyezéseknek kalciumkloriddal való lecsapása, a proteineknek fenolos kezeléssel való eltávolítása, majd molekulaszűrőn való frakcionálás után nyerhető ki, és lényegileg 11-18% aminosavból (ennek 5,5-7,5%-a alanin), 10—17% glükózból, 10-17% aminocukrokból és 5%-nál kevesebb nukleinsavból áll. Az általában 2—6% víztartalommal elkülönített, 41 200 RP jelű új anyag vízben oldható, amorf, fehér por, és szenet, hidrogént, oxigént, nitrogént, foszfort, ként, klórt, nátriumot és kalciumot tartalmaz. Száraz anyagra számított elemi összetétele nagyjából a következő: C = 45-47%, H = 7,1-7,6%, O = 35-38% (különbségből számítva), N = 4,0-5,7%, P = 0,9-1,2%, Cl = 0,1-0,4%, S = 0,5%-nál kevesebb, Na = 2,0-3,0%, Ca = 0,9-1,9%. A 41 200 RP jelű anyag előállítási eljárása lényegileg abból áll, hogy a Micrococcus sedogenes M78 törzs tenyészetéből izolált sejtek szuszpenzióját az 2 alábbiakban pontosan meghatározott hőmérsélciet, pH-érték és időtartam körülményei között (előnyösen szárítva és adott esetben 3 körüli pH-nál, 120 °C körüli hőmérsékleten 30-60 percig kezelve) lizozim- 5 mel reagáltatjuk, a kapott szuszpenzió folyadékfázisából izolált nyers terméket sóvá alakítottan különítjük el, a szennyezéseket kalciumklorid segítségével fokozatos lecsapással eltávolítjuk, majd fenollal reagáltam a proteinek lényegileg légió nagyobb részét eltávolítva tisztítjuk, és végül molekulaszűrőn frakcionálással a nagyobb molekulasúlyú, azaz 5 • 105 és 5 • 106 közötti molekulasúlyú frakciókat összegyűjtjük. A lizozimet általában a feldolgozandó száraz sej- 15 lek 1 grammjára számítva 2-20 mg mennyiségben alkalmazzuk. A kezelést állandó, 6,5 és 8 közötti, előnyösen 7 körüli pH-nál 1-3 óra, előnyösen 2 óra alatt és 37 °C hőmérsékleten erőteljes keverés közben végezzük. 20 A kapott szuszpenzió folyadékfázisát általában centrifugálással különítjük el, és az oldatban levő kis molekulasúlyú vegyületeket alkalmas porozitású membránon való dializálással vagy ultraszűréssel 25 távolítjuk el. Az így kapott nyers terméket az oldattól — sóvá alakítva — liofilizálással nyerjük ki. Az előállítási eljárásnak ebben a szakaszában a termék lényegileg proteinekből, nukleinsavakból, aminocukrokból és 5%-nál kevesebb poliszacharidokból áll, és 30 összetételének elemzése a következő adatokat adja: 181104
