179936. lajstromszámú szabadalom • Leukociták testfolyadékokban való kimutatására szolgáló diagnosztikai eszköz és eljárás ehhez megfelelő kromogének előállítására
MAGYAR SZABADALMI 179936 NÉPKÖZTÁRSASÁG LEÍRÁS Ifljl Nemzetközi osztályozás: Bejelentés napja: 1979. VIII. 21. (BO—1801) NSZO3 Elsőbbsége: 1978. VIII. 22. (P 28 36 644.1) G 01 N 33/48 C 12 Q 1/44 Német Szövetségi Köztársaság C 07 C 107/04 C 09 B 43/18 ORSZÁGOS Közzététel napja: 1982. V. 28. '< ármány/ TALÁLMÁNYI /Qß1’* .‘w\ f S^jbadatail Ts.r. . J HIVATAL Megjelent: 1984. V. 31. Feltalálók: Szabadalmas: Dr. Berger Dieter vegyész, Viernheim, Boehringer Mannheim GmbH, Dr. Braun Franz vegyész, Rimbach/Odw, . Mannheim, Frey Günter vegyészmérnök, Ludwigshafen, Német Szövetségi Köztársaság Dr. Güthlein Werner vegyész, Mannheim-Neckarau, Dr. Kuhr Manfred vegyész, Mannheim, Német Szövetségi Köztársaság Leukociták testfolyadékokban való kimutatására szolgáló diagnosztikai eszköz és eljárás ehhez megfelelő kromogének előállítására í A leukociták testfolyadékokban, különösen vizeletben való kimutatása lényeges helyet foglal el a vese és az urogenitalis traktus betegségeinek diagnosztikájában. Ezt a kimutatást eddig a leukociták nem centrifugált vizeletben vagy vizeletüledékben való fáradságos számlálásával végezték. Természetszerűleg mindkét módszerben közös, hogy csak intakt leukocitákat vesz figyelembe. Másrészt ismeretes, hogy a leukocita-lízis sebességét a vizelet tulajdonságai erősen befolyásolják, így például erősen lúgos vizeletben körülbelül 60 perces leukocita felezési idővel kell számolni. Túl alacsony leukocitaszámoknak, illetve hosszabb vizelet-állásidőnek hamis negatív leletek lehetnek a következményei. A lízis-hibától eltekintve a leukociták centrifugálatlan, homogenizált vizeletben való kvantitatív mikroszkópiás meghatározása számlálókamrában eléggé megbízható eredményeket szolgáltat. A gyakorlatban azonban ezt a módszert csak ritkán alkalmazzák, mivel fáradságos, kimerítő és időt rabló, és iskolázott személyzet alkalmazását igényli. A vizeletből történő leukocitameghatározások túlnyomó többségét az orvosi gyakorlatban az úgynevezett látótér-módszerrel végzik a vizelet üledékből. Ehhez először centrifugálással vizsgálati anyagot (üledéket) kell nyerni. Ennek során azonban a vizelet más alkotórészei is feldúsulnak, amelyek — így például sók és hámsejtek — a leukociták mikroszkópiás számlálását lényegesen megnehezítik. Kisebb üledéktartalom, az üledék inhomogenitásai, valamint eltérő mikroszkópiás nagyítások vagy a mikroszkóp eltérő optikai felépítése azt eredmé-2 nyezheti, hogy az itt szokásos, mikroszkóp látóterére megadott leukocitaszám többszáz százalékos hibákat is takarhat. \ jelen találmány feladata ezért az volt, hogy olyan 5 diagnosztikai eszközt bocsásson rendelkezésre, amelylyel a leukociták testfolyadékokban egyszerű és könnyen kezelhető módon, valamint lehetőleg gyorsan és teljesen mutathatók ki. Ilyen leukocitavizsgálat alapját egy enzimes reakció 10 szolgáltatja, mivel a leukociták széles enzimspektrummal rendelkeznek. A 30 87 794 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban már közölnek és ajánlanak egy leukocita- neghatározást, amelyet a granulocita leukocitákban 15 jelenlevő peroxidáz aktivitással végeznek. Egy hidrogénperoxiddal és valamilyen szerves indikátorral, például o-tolidinnel impregnált szívóképes hordozó színes oxidációs termék képződésével mutatja a leukociták jelenlétét. Egy ilyen teszt azonban döntő hátrányokkal is ren- 20 delkezík. Egyrészt jelentős zavaró hatást jelentenek általában a vizeletben jelenlevő redukáló anyagokkal, például aszkorbinsavval végbemenő oxidációs reakciók. Másrészt több helyen található irodalmi hivatkozás [lásd például L. Mettler, Med. Welt 23, 399 (1972)] a leu- 25 kocita-peroxidáz instabilitására vizeletben, ami hamis negatív leleteket eredményezhet. Néhány éve a hiszto- és citokémiai enzimológiában tartósan teret hódítottak olyan kolorimetriás meghatározási módszerek, amelyek a meghatározandó rendsze- 30 rekben jelenlevő enzimek észterolitikus aktivitásán ala-179936
