179435. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eszköz leukociták kimutatására testfolyadékokban és eljárás az ehhez megfelelő színképzők előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTARSASAG SZABADALMI LEÍRÁS 179435 n Bejelentés napja: 1979. VI. 19. (BO- 1792) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1978. VI. 20. (P 28 26 965 0) Nemzetközi osztályozás: NSZ03: G 01 N 33/48, C 12 Q 1/00, C 09 B 11/08, C 07 D 327/04 ORSZÁGOS találmány; HIVATAL Közzététel napja: 1982. 11. 27. Megjelent: 1984. I. 31. ( Szabadalmi Tár. ' X^ülajdon^^ Feltalálók: Szabadalmas: dr. Berger Dieter vegyész, Viernheim, dr, Braun Franz vegyész, Rin bach, Frey Günter vegyészmérnök, Ludwigshafen/Rhein, dr. Güthlein Werner vegyész, Mannheim-Neckarau, dr. Werner Wolfgang vegyész, Mannheim-Vogelstang Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim, Német Szövetségi Köztársaság Diagnosztikai eszköz leukociták kimutatására testfolyadékokban és eljárás az ehhez megfelelő színképzők előállítására 1 2 A leukociták kimutatása testfolyadékokban, különösen vizeletben kiemelkedő szerepet foglal el a vese és az urogenitális traktus megbetegedéseinek diagnosztikájában. Ezideig ezt a kimutatást a leukociták centrifugáiatlan vizeletben vagy vizelet-üledékben való fáradságos számlálásával végezték. Mindkét módszerben természetesen közös, hogy csak intakt leukocitákat vesz figyelembe. Másrészt ismeretes, hogy a leukocita-lízis sebességét a vizelet tulajdonságai befolyásolják, így például erősen lúgos vizeletben körülbelül 60 perces leukocita felezési idővel kell számolni. Túl alacsony leukocitaszámoknak illetve hosszabb vizelet-állásidőknek hamis negatív leletek a következményei. A lízis-hibától eltekintve a leukociták centrifugálatlan, homogenizált vizeletben történő kvantitatív mikroszkópiás meghatározása számlálókamrában eléggé megbízható eredményeket szolgáltat. A gyakorlatban mégis csak ritkán alkalmazzák ezt a módszert, mivel fáradságos és időtrabló, és az alkalmazás iskolázott személyzetet igényel. A vizeletből történő leukocitameghatározások túlnyomó többségét az orvosi gyakorlatban a vizeletüledékből végzik az úgynevezett látótér módszerrel. Ehhez előbb centrifugálással vizsgálati anyagot (üledéket) kell nyerni. Ekkor azonban a vizelet más alkotórészei is feldúsulnak, amelyek — így például a hámsejtek és sók — a leukociták mikroszkópos számlálását lényegesen megnehezítik. Kisebb üledéktartalom, az üledék inhomogenitása, valamint különböző nagyítások vagy a mikroszkóp eltérő optikai kiképzése azt eredményezheti, hogy a szokásos „kvantitatív” kifejezés a mikroszkóp látóterében 5 számolt leukocitákról a gyakorlatban többszáz százalékos hibát is takarhat. A jelen találmány feladata ezért az volt, hogy olyan diagnosztikai eszközt szolgáltasson, amellyel a leukociták testfolyadékokban egyszerű és könnyen 10 kezelhető módon, valamint lehetőleg gyorsan és tökéletesen mutathatók ki. Ilyen leukocitavizsgálat alapját egy enzimatikus reakció nyújtja, mivel a leukociták széles enzimspektrummal rendelkeznek. 15 A 3 087 794 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban már leírtak egy leukocitavizsgálatot, amely a granulocita leukocitákban meglevő peroxidáz aktivitásra vezethető vissza. Egy hidrogén-peroxiddal és valamilyen szerves indikátorral, 20 például o-tolidinnel impregnált szívóképes hordozó színes oxidációs termék keletkezésével jelzi a leukociták jelenlétét. Egy ilyen teszt azonban döntő hátrányokkal is rendelkezik. Egyrészt redukáló anyagokkal, így például aszkorbinsawal a vizeletben 25 végbemenő peroxidáz reakciók jelentős zavarforrást jelentenek. Másrészt több irodalmi hivatkozás [lásd például L. Mettler, Med. Welt 23, 399 (1972)] található a leukocita-peroxidáz vizeletben való instabilitására vonatkozólag, ami hamis negatív leleteket 30 eredményezhet. 179435
