175208. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens trigliceridek meghatározására
SZABADALMI 175208 MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG LEÍRÁS J|Í||fc Nemzetközi osztályozás: G 01 N 33/16 Bejelentés napja: 1976. VIII.11. (BO—1627) Elsőbbsége: Német Szövetségi Köztársaság: 1975. VIII. 12. (P 25 35 953.9) ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1979. XII.28. Megjelent: 1982. IX. 06. Feltalálóik): Szabadalmas: di. Rauscher Elli, vegyész, Bernt Erich, gyógyszerész, München, dr. Gruber Wolfgang, vegyész, Tutzing-Unter- Boehringer Mannheim GmbH., Mannheim-Waldhof, Zeismering, prof. dr. Determann Helmut, vegyész, Német Szövetségi Köztársaság Starnberg, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás és reagens trigliceridek meghatározására 1 A 2 229 849 sz. Német Szövetségi Köztársaságbeli szabadalmi leírásból ismeretes egy eljárás trigliceridek meghatározására Rhizopus arrhizusból nyert lipáz segítségével végzett enzimatikus űelszappanosí-. tással és a szabaddá vált glicerin mérésével, amely 5 eljárásra az jellemző, hogy az elszappanosítást karboxilészteráz és egy olyan alkálifém- vagy alkáli földfém-alkil-szulfát jelenlétében végzik, amelynek alkil- csoportja 10-15 szénatomos. Ennek az ismert eljárásnak az a hátránya, hogy 10 egyes esetekben, különösen sok lipoidot tartlamazó szérumoknál, zavarosodás keletkezik, amelyet a szabaddá váló zsírsavak okoznak, és ez az optikai meghatározást nagyon zavaiia. Elvileg lehetséges ugyan, hogy a zsírsavakat detergensek hozzáadásával 15 oldatban tartsuk azonban az ehhez szükséges mennyiségű detergens már gátolja az enzimeket. Igen nagyszámú felületaktív anyag vizsgálata azt az eredményt adta, hogy ezen anyagok egyike sem megfelelő arra, hogy mindkét követelményt kielégítse, azaz gátolja a 20 zavarosodást, és ne zavaija az enzimaktivitást. A találmány célja az, hogy trigliceridek meghatározására olyan eljárást és reagenst bocsásson rendelkezésre, amely lehetővé teszi a teljesen enzimatikus elszappanosítást és meghatározást, meggátolja a szabaddá váló zsírsavak által okozott zavarosodást, és nem befolyásolja hátrányosan az enzimaktivitást. Ezt a feladatot a találmány szerint a bevezetőben említett olyan eljárással oldottuk meg, amelyet az 2 CH2 0)nH általános képletű vegyületet is hozzáadunk, ahol R jelentése 14-20 szénatomos alkil- vagy alkenil-csoport, és n jelentése 7-20-ig terjedő egész szám. A 2 327 894 sz. Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságra hozatali iratból ismeretes már egy eljárás vérmintákban vagy szérumban trigliceridek — tehát nem ezek elszappanositási termékei - által okozott zavarosodások meggátlására. Az eljárás szerint a mintához 9-20 mól etilén-oxiddal polioxi-etilezett laurinsavszármazékot adnak hozzá. Kísérletekből kiderült, hogy ez a szer a trigliceridek enzimatikus hasításakor fellépő zavarosodást nem gátolja, de gátolja a lipolizist. Az emlitett vegyület ezért a találmány alapját képező probléma megoldására nem megfelelő. A találmány szerinti eljáráshoz előnyösen Rhizopus arrhizus-ból származó lipázt alkalmazunk. Alkalmazhatók azonban más lipázok is, anélkük, hogy a reakció időtartamát vagy a reakcióhőmérsékletet növelni kellene. Valamely lipáznak a találmány szerinti eljárásban történő felhasználhatóságát részben a karboxil-észteráz dönti el. Karboxilészterázként előnyösen mikroorganizmusokból származó valamilyen ismert észterázt használunk. A lipáznak a 2 229 849 sz. Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírás szerinti, alkil-szulfáttal történő aktiválását nemcsak elérjük, hanem ehhez viszonyítva a reakció időtartal-175208
