175050. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás neomycin előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1977. VII. 05. (BI-558) 175050 Nemzetközi osztályozás: C 12 D 9/16, C 07 H 15/22 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1979. XI. 28. Megjelent: 1980. XI. 29. Feltalálók: Szabadalmas: Dr. Kaszab István biológus, 19%, Víg János üzemmérnök, 16%, Dr. Erdei Jánosné Biogal Gyógyszergyár, Debrecen biológus, 13%, Hőgye Irma vegyészmérnök, 12%, Dr. Pólya Kálmán biológus, 10%, Makádi Béla üzemmérnök, 10%, Dr. Erdei János biológus, 10%, Fazekas József vegyésztechnikus, 10%, Debrecen Új eljárás neomycin előállítására 1 A találmány tárgya új eljárás neomycin előállítására a 00165 szám alatt deponált Streptomyces fradiae LN—47 sz. mutáns és a mutánsból készült kultúrák segítségével úgy, hogy inokulum fermentációként 0,25-0,32% nitrogént, 2,2-2,8% nehezen metabolizálható szénhidrátot és szervetlen sókat, előfermentációként 0,18-0,22% nitrogént 3,8- —4,2% nehezen metabolizálható szénhidrátot és 1,8—2,2% könnyen metabolizálható szénhidrátot és szervetlen sókat, majd főfermentációként 0,38- -0,45% nitrogént, 5,8-7,0% nehezen metabolizálható szénhidrátot és 0,8—1,2% könnyen metabolizálható szénhidrátot és szervetlen sókat tartalmazó táptalajt alkalmazva, a tenyésztést 40 órás korig 32 °C-on, majd végig 34 °C-on, 2-3 kW/m3 bekevert energia alkalmazása mellett, levegőztetve, 0,4—1,0 atm belső nyomás tartásával, 120-150- órán keresztül végezve, az így előállított fermentlé szűrletéből a neomycint ismert módon kinyerjük. Ismeretes, hogy az amino-glükozid típusú antibiotikumok közül a neomycin az elsők között volt, melyet gyógyászati alkalmazásra forgalomba hoztak (788 972 számú Nagy-Britannia-i szabadalom, 1958., 150473 számú magyar szabadalom, 1961., 112 577 számú csehszlovák szabadalom, 1964., Indian J. Exp. Bioi. Í972. 10/3 224-7, C.A. 77, 135 604 K, 1972). A szakirodalomból ismert eljárások közül a legmagasabb fermentációs hozamot 17 000 gamma/ml-t (3 352 761 számú Amerikai Egyesült Államok-beli 2 szabadalom, 1967.) a szerzők amilopektin alkalmazásával, rozsdamentes rendszerben dolgozva értek el. Ugyancsak rozsdamentes rendszert, de iparilag is 5 alkalmazható táptalaj-anyagokat használ fel az 1 222 440 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírás szerinti eljárás 1971., mely 12 500 gamma/ml fermentációs hozamot ért el. Eljárásunk fermentációs hozama, melyet a 4. 10 kiviteli példában mutatunk be, 18 700 gamma/ml, amit eljárásunk szerint szénacél fermentorban értünk el. A fermentációs úton előállított hatóanyag kinyerésére előnyösen volt alkalmazható a 169 452- számú magyar szabadalmi leírás szerinti eljárás. 15 Eljárásunk alapja az a felismerés, hogy LN-47 sz. etilén-imin mutánsunk, melyet etilén-imin mutagénként való hasznosításával állítottunk elő az alábbiakban leírt módszerrel, az eddig ismertnél magasabb hozamra képes, amennyiben tenyésztését 20 megfelelő összetételű táptalajon végezzük. Az LN-47 sz. mutáns előállítására alkalmazott eljárás a következő volt: A 6/11 jelzésű törzsből készített spóraszuszpenziót kezeltük ' 0,03 térfogat% etilén-iminnel 3 órán 25 át. Az etilén-imint puffer oldattal és a spórák centrifugálásával távolítottuk el a rendszerből. A túlélőket előszelekciónak vetettük alá a következő módon: A kezelés után kapott spórákat maltóz tartalmú 30 tápfolyadékban rázott fermentációban csíráztattuk 175050
