173920. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hemagglutinin és neuraminidáz keverék szelektív elkülönítésére influenzavírusból
173920 MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1975. I. 13. (SA-2736) Svájci elsőbbsége: 1974. I. 14. (447/74) Nemzetközi osztályozás: C 12 K 5/00 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1979. I. 27. Megjelent: 1980. I. 31. Feltalálók: Szabadalmas: Bachmayer Helmut vegyész, Maria Enzersdorf, Sandoz A. G., Basel, Svájc Schmidt Gerhard biológus, Mödling, Ausztria Eljárás hemagglutinin és neuraminidáz keverék szelektív elkülönítésére influenzavírusból 1 A találmány tárgya új eljárás A és B típusú influenzavírus immunogén komponensei, azaz a hemagglutinin és neuraminidáz keverékének elkülönítésére az influenzavírusból az immunogén keverék szelektív leoldásával és elkülönítésével. Az 1. ábra egy influenza-vírus részecske vázlatos képét mutatja. Az RNA ribonukleinsav genetikus anyagot a csoportspecifikus NP nukleoproteinnel együtt egy kettős hártya veszi körül, amely belső PR proteinrétegből és a gazdasejtből eredő L lipidrétégből áll. Két glikoprotein, HA hemagglutinin és NA neuraminidáz tüskékként jelentkeznek a vírusburok felületén. RNA-P RNA-polimerázt jelent [Adv. Vírus Rés. 18, 1-55 (1973)]. Ismeretes, hogy a két glikoprotein, a hemagglutinin és a neuraminidáz az influenza-vírus legfontosabb komponensei [Post-grad. med. J. 49, 159-163 (1973)], míg az összes többi komponens, beleértve más vírusproteineket, nukleinsavakat és lipideket, az immunitás kialakulása szempontjából nem lényegesek (Adv. Virus Res. 18, 1-55 (1973)]. Ezeknek a nem lényeges anyagoknak influenza-vakcinában való jelenléte azonban nemkívánatos mellékhatásokhoz vezethet. Minden esetben a nem lényeges anyagok jelenléte a beadható vakcina mennyiségét és ennek megfelelően az elérhető immunitás fokát korlátozza. 2 Itt és a továbbiakban immunogénnek az antigének olyan tulajdonságát nevezzük, amely az állati vagy emberi szervezetet a megbetegedéstől védő antitestekkel szemben stimulálja. Az influenza ese- 5 tén két ilyen immunogén van, nevezetesen a hemagglutinin és a neuraminidáz, ezt immunogén keveréknek jelöljük. Az ideális influenza-vakcinának tehát a két alapvető immunogénből, a hemaggiutininból és a neura- 10 minidázból kell állnia a vírusrészecske nem lényeges komponenseitől lényegében mentesen. Az infiuenza-immunogének leválasztására irányuló korábbi kísérletek lényege az volt hogy először megkísérelték a vírusrészecskét teljesen felhasítani vagy szo- 15 lubilizálni például anionos detergens amilyen a nátriumdezoxikolát vagy nátriumdodecilszulfát segítségével. Anionos és nemionos detergensek használata esetén azonban, ha a detergens és protein aránya kicsi, a szubvirális részecskék ugyan érintet- 20 lenek, de a hemagglutinin és neuraminidáz csak részlegesen szolubilizálható, míg nagy detergens koncentrációnál a víruskomponensek összes vagy jelentősebb része is felszabadult és az immunogénekkei együtt oldódott (Adv. Virus Res. 18, 25 57-103(1973), FEBS Lett. 29, 185-188 (1973)]. Ezenkívül a kívánt immunogének utólagos teljes vagy részleges tisztítására is szükség volt, amely rendkívül nagy ügyeimet igényelt, és az elért kitermelés alacsony volt. A kapott vakcinák az in- 30 takt vírusokkal összehasonlítva erősen mérsékelt 173920
