173315. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cink-bacitracin előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI 173315 LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1973. XII. 28. (Cl-1429) Nemzetközi osztályozás. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1978. IX. 28. Megjelent: 1980. VI. 30. C 12 D 9/20 Feltalálók Szabadalmas: István Sándor vegyészmérnök, 20%, Chinoin Gyógyszer és Vegyészeti Dr. Járai Miklós mikrobiológus, 20%, Termékek Gyára Rt., Budapest Piukovich Sándor vegyész, 20%, Dr. Horváth István vegyész, 20%, Inczeffy István mikrobiológus, 20%, Budapest Eljárás cink-bacitracin előállítására 1 A vonatkozó szakirodalom különböző aktivitású törzseket említ bacitracin termelés céljára, melyek a B. subtilis és a D. licheniformis fajokhoz tartoznak. így például a szabadalmi leírások közül a 2 813 061 számú amerikai 323 E/ml, a 2 985 534 számú amerikai 200 E/ml bacitracintermelést ad meg; a 61 062 számú lengyel 226 E/ml, az 1 594 743 számú francia 228-298 E/ml és a 26 464 számú belga közzétételi irat 490 510 E/ml bacitracintermelést említ. A bacitracin izolálására több eljárás ismert. így a 157 983 sz magyar szabadalmi leírás szerint a bacitracint vizes oldatból pH 2 9 között naftilszulfonsav-formaldehid kondenzátum vízoldható sójával képzett komplex formájából csapják ki. A bacitracin izolálha tó oly módon is, hogy (R-X-SOj-H)« "Me* Bacitracin/,, formájú oldhatatlan komplexbe visszük és a fermentlétől szűréssel elkülönítjük, majd alkohollal felszabadítjuk. (476 838 sz. svájci szabadalmi leírás.) A bacitracin izolálására vonatkozó javított eljárást ismertet a 2 314 944 sz. német szövetségi köztársaságbeli nyilvánosságra hozatali irat, mely szerint a bacitracint fermentált sőrléből pH-7 értéken butanollal, majd a butanolos fázisból vizes foszforsavval extraháljuk és a foszforsavas fázisból kalciumoxidos vagy kaldumhidroxidos kezelés útján izolálják. Badtracin vizes oldatból történő izolálását ismerteti nem ionos gyantán történd adxzorbeáltatással, majd azt követő alkoholos extrahilással az 1 286 886 sz. nagybntan«”Ntdalmi leírás. Kísérleteinkben célul tűztük ki, hogy a badtracint 173315 termelő Bacillus törzsből olyan mutánst állítsunk elő, amely a szakirodalomból ismert termelőképességű törzseknél nagyobb hozamú, majd a kapott törzseket fermentáljuk 5 Az antibiotikumtermelő törzsek termelőképességé nek fokozása különösen nehéz feladat a már eleve magas aktivitású törzsek esetében így pl. egyik a kísérleteinkben használt B licheniformis törzsnek a szokásos mutagénekkel való kezelése vagy nem spéciit) fikus anyagokkal végzett torzsszelekciója (150018 sz., 1 51 31 2 sz és 1 52 502 sz magyar szabadalmak), nem eredményezett a kezdeti 470 4 80 E/m)-nél több antibiotikumot termelő mutánst 15 Mivel ismeretes (Biochim. Biophys, Acta 86, 46 55, 1964), hogy kémiailag definiált táptalajon a bacitracin bio-szintézis sebességét két aminosav a dsztein és az izoleucin koncentrádója határozza meg. feltételeztük, hogy természetes táptalajt alkalmazva is 20 e két anunosav felhalmozódásának vagy szintézisének sebessége a bacitracintermeiés meghatározója. A két aminosav adagolásával természetes nyersanyagokat tartalmazó táptalajon azonban nem kaptunk kedve ző eredményt 25 Találmányunk alapja az a felismerés, hogy az izo leucin bioszintézise szempontjából derepresszált mutánsokkal nagyobb bacitradntermêlés érhető el. E mutánsok előállítására az izoleudnhidroxamát segítségével végzett törzsszelekció biztosította a kedvező 30 lehetőséget, amely anyaggal a Chiba ta és munkatársai
