173101. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimtartalmú mikroorganizmus sejtek rögzítésére
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG A SZABADALMI LEÍRÁS 173101 Bejelentés napja: 1975. III. 26. (Pl—455) Elsőbbsége: Amerikai Egyesült Államok: 1974. III. 27. (455. 143) Nemzetközi osztályozás: C 07 G 7/02 C 12 K 1/00 ORSZÁGOS Közzététel napja: 1978. VII. 28. TALÁLMÁNYI HIVATAL Megjelent: 1979.XI.30. Feltalálót k) : NELSON Roger Peter vegyész, Waterford, Connecticut, Amerikai Egyesült Államok Tulajdonos: Pfizer Inc., New York, New York, Amerikai Egyesült Államok Eljárás enzimtartalmu mikroorganizmus sejtek rögzítésére 1 A találmány tárgya eljárás enzim tartalmú mikroorganizmus-sejtek rögzítésére. Részletesebben, a találmány kötött mikroorganizmus sejtek előállítására vonatkozik. Az enzimeket nagyfokú fajlagosságuk miatt igen 5 előnyösen használhatjuk sok kémiai reakció katalizátoraként. Mostanáig azonban olyan tényezők miatt, mint a magas előállítási költségek, a teljes sejtből való eltávolításuk után mutatkozó instabilitásuk és csakis oldható alakban való használhatóságuk miatt csak 10 szűk területen voltak használhatók. Az enzimeket szilárd halmazállapotú vivőanyagra való kötésükkel vagy ebbe való beépítésükkel immobilizáljuk, így a fenti nehézségek egy részét megoldjuk és használatuk gazdaságossá válik. 15 Az enzimek szilárd fázishoz való kötésére vonatkozó különböző fizikai és kémiai módszereket például Zaborsky „Immobilized Enzymes” című (CRC Press, 1973) munkájából ismerhetjük meg. Használatos az enzim elkülönítésére és a stabilitási 20 nehézségek megoldására magának a teljes sejtnek az immobilizációja is. Ez azonban csak fizikai módszerek kapcsán ismert. Jellemző példa erre az aktív glükózizomerázt tartalmazó Streptomyces phaeochromogenes sejtjeinek adszorpciója kezelt bőr-kollagénre [Bio- 25 tech. and Bioeng.,.15, 565 (1973)] és az S-vegyület kortizollá alakítására használt hidroxiláz enzimet tartalmazó gombasejtek gélbe zárása (Scientific American, 1971. március, 30. oldal). Ezen immobilizálási eljárások azonban nem záiják 30 ki a sejtek leválását a hordozóról. A kötőerők természete olyan, hogy ezek a reakciókörülményeket szigorúan meghatározzák, ugyanis csak így gátolható vagy csökkenthető az enzimaktivitás csökkenésével és a kezelendő folyadék lehetséges szennyezésével járó enzimleválás. A találmány egy állandóbb sejtkötődést biztosító eljárásra vonatkozik. Ismeretes továbbá a 805.157 sz. belga szabadalmi leírásból olyan, mikroorganizmus sejtek rögzítésére szolgáló eljárás, ahol a találmány szerinti eljárással ellentétben vízoldható anyagot használnak. A 2.140.541 sz. francia szabadalmi leírás nem baktériumok, élesztők, aktinomyces-ek és gombák sejtjeinek rögzítésére, hanem protein immobilizálására ismertet eljárást. Az 1.257.263 sz. Nagy-Britannia-i szabadalmi leírás mikroorganizmus sejtek rögzítésére szolgáló eljárást ír le, azonban erre a célra a találmányunk szerintiektől eltérő polimereket használnak. Úgy találtuk, hogy mikroorganizmus sejtek hatékonyan rögzíthetők oly módon, hogy a sejteket kovalens kémiai kötésekkel egy polimer mátrix vízben oldhatatlan részecskéire kötjük. A kémiai kötés kialakítható az elkészített polimerrel, vagy a polimerizáció előtt a reakcióképes monomerekkel is. Ezenfelül úgy találtuk, hogyha a sejteket akár a rögzítés előtt, alatt vagy után egy polifunkcionális, keresztkötéseket létrehozó vegyülettel kezeljük, úgy csökken a sejtek enzimvesztesége. A találmány tárgya tehát eljárás vízben oldhatatlan polimer részecskékhez kovalens kötésekkel rögzített mikroorganizmus sejtekből álló készítmény előállítására, vagyis mikroorganizmus sejtek rögzítésére, melynek során a mikroorganizmus sejtjeit egy polimer kö-173101
