172872. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peroxidáz enzim előállításra
172872 MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1976. IX. 29. (RE—600) Nemzetközi osztályozás: C 07 G 7/022 Közzététel napja: 1978. VI. 28. Megjelent: 1979. V. 31. Feltalálók: Tulajdonos: Kalmár Dezső vegyészmérnök 30%, Csóka Árpád vegyészmérnök 30%, Reanal Finomvegyszergyár, Boros Gyula vegyész-technikus 20%, Szombathelyi Dezső vegyész- Budapest mérnök 15%, dr. Pálmai György vegyészmérnök 5%, Budapest Eljárás peroxidáz enzim előállítására 1 A találmány tárgya eljárás peroxidáz enzim előállítására. Ismeretes, hogy a peroxidáz a növényvilágban általánosan előforduló globuláris fehérje, amelyet leggyakrabban a torma gyökeréből különítenek el. 5 A tormaperoxidáz átlagos molekulasúlya 40 000. Vízben és híg vizes oldatokban jól oldódik, szerves oldószerekben oldhatatlan. Vizes oldatokban az enzimek között szokatlanul stabil és viszonylag hőálló. A liofilizálást jól búja, tiszta állapotban 10 kristályosítható, világosbarna por. A peroxidáz enzim alkalmazási területe igen széles: mivel a hidrogénperoxid bomlását katalizálja, minden olyan reakcióban felhasználható a hidrogénperoxid vagy a reakciópartner kimutatására 15 vagy meghatározására, amelyben hidrogénperoxid keletkezik vagy reakcióba lép. A biokémiai és orvosdiagnosztikai gyakorlatban például testnedvek glükóztartalmának meghatározására, valamint vér és hidrogénperoxid kimutatására használják. További 20 felhasználási területei: szerves anyagok oxidációja, peroxid tartalmú szennyvizek és reaktor-hűtővizek tisztítása. A peroxidáz minőségi jellemzőjeként fajlagos aktivitását E/mg (milligrammja egy perc alatt hány 25 mikromol peroxidot képes elbontani) egységben és az RZ (Reinheitszahl: a 403 és 275 tun hullámhosszakon mért extinkciók hányadosa) értéket szokták megadni. A peroxidáz enzim felhasználása az utóbbi években nemcsak mennyiségileg fokozó- 30 2 dik, hanem az orvosdiagnosztikában szigorú minőségi követelményeket is támasztanak. Elsősorban az 1000 E/mg-nál nagyobb fajlagos aktivitású termékek keresettek. A peroxidáz előállítására szolgáló ismert eljárások (S.P. Colowick és N.O- Kaplan: Methods in Enzimology, II. kötet, 801. oldal, Acad. Press, New York, 1955) torma vagy feketeretek gyökérből indulnak ki: a gyökeret duzzasztják, utána aprítják, majd vízzel extrahálják. Az extraktumból a növényi maradékot centrifugálással vagy szűréssel távolítják el. A nagytérfogatú fehéijeoldatból az 50 és 90%-os telítési értékek között kicsapódó peroxidáz tartalmú frakciót ammónium-szulfáttal kisózzák. A csapadékot desztillált vízben oldják majd a fehéijeoldatot hosszadalmas dialízissel szabadítják meg a szervetlen sótól, végűi a nyers peroxidázt acetonnal vagy etanollal frakcionáltan kicsapják. A nyers termékből a tiszta enzimet kalcium-foszfát-géles adszorpcióval és preparatív gélelektroforézissel nyerik ki. Hasonlóképpen hosszadalmas és sok veszteséggel jár a P.M. Cooper és J.F. Largier által ismertetett eljárás [Process Biochemistry, 3 (8), 22 (1968)], amely többszöri dializálást alkalmaz. A 165 727 lajstromszámú magyar szabadalom eljárást közöl peroxidáz előállítására az élelmiszeriparban hulladékként keletkező tormafehéritő és mosólevekből. A korábbi eljárásokkal összehason-172872
