172223. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy diszulfidhídon kívól legalább egy ciszteingyököt tartalmazó peptidek előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 172223 C|) Bejelentés napja: 1974. V. 23. (Cl—1478) Elsőbbsége: Svájc 1973. V. 24. (7526/73) 1973. IX. 14. (13274/73) Nemzetközi osztályozás: C 07 C 103/52 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1978. II. 28. Megjelent: 1979. V. 31. Feltalálók : dr. Kamber Brúnó vegyész, Bázel, Sieber Peter vegyész, Reinach, dr. Riniker Bernhard vegyész, Frenkendorf, Svájc, dr. Hartmann Albert vegyész, Grenzach, NSZK, dr. Rittel Wemer vegyész, Bázel, Svájc Tulajdonos: Ciba-Geigy AG., Bázel, Svájc Eljárás egy diszulfidhídon kívül legalább egy ciszteingyököt tartalmazó peptidek előállítására 1 A találmány tárgya új eljárás olyan peptidek előállítására, amelyek egy diszulfidhídon kívül legalább egy ciszteingyököt tartalmaznak. Ilyen peptidek például az inzulinok, proinzulinok, növekedést szabályozó hormonok, ribonukleázok, lizocim, apamin, relaxinok, szomatomedinek, idegnövekedést elősegítő (NGF) vagy epidermális szövetek növekedését segítő (EGF) anyagok és e természetes anyagok töredékei vagy szintetikus megfelelői vagy ezek származékai. Inzulinnál például a vegyületek A és B láncból állnak, amely peptidláncok diszulfidhidak útján vannak egymással összekötve [Biochem. Biophys. Rés. Comm. 55,60 (1973)]. Ilyen peptidek szintetikus előállításánál nehézséget jelent a cisztein-tartalmú aminosavak oly módon való oxidálása, hogy a diszulfidkötések a kívánt cisztein-maradékok között, amelyek egy vagy két láncban lehetnek, kialakuljanak. Az ismert, szelektív módon lehasítható merkaptovédőcsoportok alkalmazása által a problémát mindeddig nem sikerült kielégítően megoldani. Alkalikusan vagy hidrogenolitikusan lehasítható csoportok már azért sem kedvezőek, mert a lehasítás körülményei között a peptid részleges bomlása, nevezetesen a diszulfidkötésen, könnyen végbemegy. Savasan lehasítható védő-csoportoknál kielégítő szelektivitás nehezen érhető el. Nagy nehézség van abban is, hogy — amennyiben az első diszulfidkötés létrehozásához szükséges merkaptocsoportokat felszabadítottuk és ezekből a diszulfidkötést oxidáció útján kialakítottuk — egy további, másik 2 védőcsoporttal még védett, merkapto-csoport lehasítása után reagálhat a diszuifidkötéssel a molekula részekre bomlása közben. Azt találtuk, hogy egynél több diszuifidkötéssel ren- 5 delkező peptidek vagy peptid-származékok meglepő módon előnyösen állíthatók elő az általunk kidolgozott eljárással. Az eljárás azon alapszik, hogy a merkapto-védőcsoportok szelektíven lehasíthatók polihalogénezett rövidít) szénláncú alifás oxi- vagy oxo-vegyületekben, mindenekelőtt rövidszénláncú alkanolokban, különösen trifluoretanolban vagy hexafluor-2-propanolban. Merkapto-védőcsoportokként ciszteingyökökre aralkil-típusú csoportok, például a tritil-csoport, és acilami- 15 nometil-csoportok, például az acetilaminometil-csoport, ismertek. Ezek a csoportok előnyösen jóddal lehasíthatók, mímellett egyidejűleg a cisztingyökké való oxidáció végbemegy, ahogy az 1 259 017 és az 1 329 860 számú nagy-britanniai szabadalmi leírások ismertetik. Azt ta- 20 láltuk, hogy ez a két fajta merkapto-védőcsoport nagyon jól lehasítható szelektíven, ha a két védő-csoport fajtát tartalmazó ciszteinpeptidet az említett polihalogénezett vegyületekben, különösen trifluoretanolban vagy 1,1,1,3,3,3-hexafluor-2-propanolban jóddal kezel- 25 jük. Eközben csak a két aralkil-védett ciszteingyök oxidálódik cisztinné, míg az acilaminometil-védőcsoport változatlan marad. Ily módon tehát a kívánt helyen egy cisztin-S-S-híddal rendelkező peptid-származékot kapunk, amely még egy vagy kettő acilaminometil-védett risztéin- 30 gyököt tartalmaz. A második diszulfidkötés a polihalo-172223 1
