171962. lajstromszámú szabadalom • Eljárás laktát-dehidrogenáz izomerjeinek egyidejű vagy külön történő meghatározásáram és diagnosztikai eszköz a meghatározás elvégzésére
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1975. IX. 12. (SCHA-170) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1974. IX. 12. (P 24 43 741.0) Közzététel napja: 1977. XI. 28. Megjelent: 1978. XI. 30. 171962 Nemzetközi osztályozás: G 01 N 33/16 yvtf !-'-«M fe; '$$& Feltaláló: Prof. dr. Lamprecht Walter tanár, Isernhagen, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Kommanditgesellschaft Schwarzhaupt, Köln, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás laktát-dehidrogenáz izomerjeinek egyidejű vagy külön-külön történő meghatározására és diagnosztikai eszköz a meghatározás elvégzésére A találmány tárgya eljárás a laktát-dehidrogenáz (továbbiakban rövidítve: LDH) izoenzimjeinek, különösen az LDH-4 és LDH-5 izoenzimek egyidejű vagy külön-külön történő meghatározására laktat és nikotinamid-adenin-dinukleotid (továbbiakban rö- 5 vidítve: NAD) piruváttá konvertálása útján, és diagnosztikai eszköz a meghatározás elvégzésére. Ismeretes, hogy az LDH ötféle izoenzimje formájában fordul elő. Az egyes izoenzimek aktivitásának meghatározásánál a különböző szubsztrát- io és pHoptimumok fontos jellemzők, bár az egyes izoenzimekhez tartozó pH-optimumok eddig még nem teljes mértékben váltak ismertté. Az összes izoenzim meghatározására eddig az izoenzimeket egymástól elektroforetikusan elválasz- 15 torták (lásd például a Kowalewski, S. L. szerkesztésében megjelenő „Reihe Biochemie und Klinik" sorozat „Die Isoenzyme der Lactatdehydrogenase" című kiadványának 29. oldalán, a sorozat ezen kiadványa Georg Thieme Verlag stuttgarti kiadó gon- 20 dozásában 1972-ben jelent meg) vagy pedig az LDH-t oldatban tartották, az LDH-2, LDH-3, LDH-4 és LDH—5 izoenzimeket valamilyen módon megkötötték és a leggyakrabban előforduló LDH-1 izoenzimet meghatározták. Ezen utóbbi 25 meghatározási módszert részletesen ismertetik például a Verlag Chemie weinheimi (Német Szövetségi Köztársaság) kiadó gondozásában 1970-ben megjelent „Enzymatische Analyse" című könyv első kötetének 557. oldalán. Ezen utóbbi irodalmi he- 30 lyen a laktat piruváttá konvertálásához optimális pH-értékként a 8,3 és 8,9 közötti tartományt írják elő. Kétségkívül minden eddigi ismert meghatározási módszernél bázikus vagy legfeljebb csaknem semleges pH-tartományt javasolnak a meghatározáshoz abból a célból, hogy lehetőség szerint az összes izoenzim együttesen meghatározható legyen. Lamprecht és munkatársai megállapították, hogy az egyes izoenzimek a pH változásakor egymásba átalakulhatnak, vagyis szerkezeti változásuk megy végbe [lásd: Cardiology, 56, 371-375 (1971-1972), és a Verlag der Wiener Medizinischen Akademie, bécsi kiadó gondozásában 1972-ben megjelent „Fortschritte der klinischen Chemie, Enzyme und Hormone" című kiadvány 277-283. oldalán]. Célul tűztük ki, hogy az ismert eljárásoknál az egyes izoenzimek egymástól való elválasztásához szükséges bonyolult és nehézkes módszerek hátrányait, valamint az összes LDH-aktivitás meghatározásánál eddig mindig jelentkező pontatlanságot kiküszöböljük, és lehetővé tegyük az LDH-4 és/vagy LDH—5, vagy ezek egymással vagy más LDH-izoenzimekkel alkotott keverékeinek optimális meghatározhatóságát. Azt találtuk, hogy a pH értékének a semleges pH-érték, vagyis 7 alá csökkentése a laktat és az NAD+ önmagában ismert módon piruváttá történő reagáltatásánál az LDH-4 és az LDH-5 izoenzimeknek optimális meghatározásához vezet. Külö-171962
