171383. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunogén anyagok elkülönítésére Pasteurella Haemolytica vagy Pasteurella multocida törzsekből és ezeket tartalmazó vakcina előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. III. 29. (WE-484) Nagy-Britanniai elsőbbsége: 1972. III. 29. (14910/72) 1973. II. 07. (5935/73) Közzététel napja: 1977. VII. 28. Megjelent: 1978. VII. 31. 171383 Nemzetközi osztályozás: C07G 7/00 C12K 9/00 A 61 K 39/02 /v Feltalálók: Penn Charles William kutató vegyész, London, Nagy László Kálmán kutató vegyész, Beckenham, Nagy-Britannia Tulajdonos: The Wellcome Foundation Limited, London, Nagy-Britannia Eljárás immunogén anyagok elkülönítésére Pasteurella haemolytica vagy Pasteurella multocida törzsekből és ezeket tartalmazó vakcina előállítására 1 2 A találmány tárgya eljárás immunogén anyagok elkülönítésére. A találmány szerinti eljárással Pasteurella multocida és Pasteurella haemolytica antigéneket különítünk el, elsősorban olyanokat, amelyek emlősökön és szárnyasokon a Pasteurella 5 multocida vagy Pasteurella haemolytica mikroorganizmus által okozott vagy e mikroorganizmusokkal kapcsolatos megbetegedésekkel (például vérmérgezéssel stb.) szemben immunhatást váltanak ki. Egyes Pasteurella multocida (a továbbiakban: io P. multocida) antigének sajátságait már évek óta tanulmányozták. A jelenleg rendelkezésre álló vakcinákat rendszerint elölt teljes tenyészetekből állítják elő. Egyes P. multocida sejtekből különböző frakciókat is elkülönítettek, ezek a frakciók 15 azonban általában nem fejtettek ki megfelelő védőhatást a kísérleti állatokon. Egyes szerzők a Roberts-rendszer szerint [Roberts. R.S.: J. Comp. Path. 57, 261 (1947)] az I. típusba tartozó P. multocida-sejtek immunogén hatását a fentiek 20 szerint elkülönített fehérje-, liposzacharid-fehérje-komplex- és/vagy szénhidrát-fehérje-frakciók jelenlétének tulajdonították. A jelenleg használatos, fehérjétől eltérő anyagokat tartalmazó vakcinák azonban kisebb-nagyobb mértékben toxikusnak 25 vagy hatástalannak bizonyultak. A J. Bact. 93 (1), 7-14 (1967) (Chem. Abstr. 66, 2735lq) szakcikk eljárást ismertet antigén hatású komplex anyagok elkülönítésére virulens, tokos Pasteurella multocida sejtekből. Az eljárás 30 szerint a Pasteurella multocida törzs tenyésztésével kapott tokos sejteket nátriumklorid-oldattal elegyítik, a kapott szuszpenziót centrifugálják, majd a felső folyadékfázist szűrik és ismét centrifugálják. Az így elkülönített anyagot formalin-tartalmú nátriumklorid-oldatban szuszpendálják, majd a szuszpenziót 105 000 g gyorsuláson ismét centrifugálják. Ezzel az eljárással azonban az endotoxin nem távolítható el, és a kapott antigén hatású anyag emlősökön toxikus tüneteket okoz. A Chem. Abstr. 68, 18704w referátum eljárást ismertet egy toxin elkülönítésére Pasteurella multocida sejtekből. Ezzel a módszerrel azonban nem a lipo-poliszacharid típusú endotoxint, hanem egy pontosan még nem azonosított fehérje-jellegű anyagot különítenek el. Az idézett referátum nem tartalmaz útmutatást arra vonatkozólag, hogy az eljárás során a Pasteurella multocida törzs tokos variánsaiból, nem-tokos variánsaiból vagy tiszta tenyészetéből indulnak-e ki. Azt találtuk, hogy a P. multocida vagy P. haemolytica tokos variánsainak felhasználásával emlősök és szárnyasok P. multocida vagy P. haemolytica fertőzéssel szembeni immunizálására alkalmas immunogén anyag állítható elő, amely nem vált ki az endotoxinra jellemző toxicitási tüneteket. Az endotoxin a Gram-negatív mikroorganizmusok sejtfalának egyik komponense, amely a klinikai gyakorlatban vagy kísérletekben felhasznált, 171383