171217. lajstromszámú szabadalom • Eljárás amiláz-inhibitor előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. III. 1. Elsőbbsége: Német Szövetségi Köztársaság: 1972. III. 1. (P 22 09 833.5) Közzététel napja: 1977. VII. 28. Megjelent: 1978. VI. 30. (BA—2884) 17121T Nemzetközi osztályozás: C 12 D 13/00 C 07 G 7/00 C 12 K 9/00 Feltalálók: dr. Frommer Werner mikrobiológus, dr. Puls Walter orvos, dr. Schmidt Delf vegyész, . Wuppertal, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Bayer AG., Leverkusen, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás amiláz-inhibitor előállítására i A találmány tárgya új eljárás megnövelt amiláz-inhibitor hatású termék előállítására. Közelebbről megjelölve, a találmány tárgya új eljárás amiláz-inhibitor előállítására, egy, az eddig ismertnél nagyobb termelőképességű törzzsel lefolytatott fermentáció útján. 5 Korábbi szabadalmi bejelentések (német szövetségi köztársaságbeli 20 64 092 sz. szabadalmi közrebocsátási irat) tárgyát képezte már az a felismerés, hogy Actinomyces-fajok egész sora képes glükozid-hidroláz-inhibitoroknak, mégpedig különösen az emésztőtrak- 10 tusban jelenlevő, főként szénhidrátokat hasító enzimek glükozid-hidrolázait gátló inhibitoroknak a termelésére. Az ilyen inhibitorok egy csoportja hővel szemben viszonylag stabil, szobahőmérsékleten pedig stabil a savak és alkáliák hatásával szemben is. Ezek az inhibitorok 15 kémiailag az oligoszacharidok vagy poliszacharidok, illetőleg származékaik osztályába tartoznak. Az említett korábbi szabadalmi bejelentésekben, így például az idézett 20 64 092 német szövetségi köztársa- 20 ságbeli szabadalmi közrebocsátási irat 28—38. példájában eljárást ismertettek egy ilyenfajta amiláz-inhibitornak az Actinomycetales rendbe tartozó SE 50 Actin oplanacea-törzs felhasználásával történő előállítására. Az említett törzzsel optimális körülmények között lefoly- 25 tátott fermentáció útján kapott oldatban körülbelül 30 000—40 000 egység/ml koncentrációban van jelen az inhibitor; az így kapott fermentléből kinyert legtisztább inhibitor-készítmény fajlagos amiláz-inhibitor-aktivitása 3—8.106 egység/g. 30 A találmány tárgyát oly eljárás képezi amiláz-inhibitor előállítására, amelynek segítségével lényegesen nagyobb hozammal és igen tiszta állapotban kapjuk az említett amiláz-inhibitort, mint a fent idézett korábbi szabadalmi bejelentésekben leírt eljárások szerint. Azt találtuk ugyanis, hogy az említett SE 50 törzs egyik variánsának, nevezetesen az SE 50/13 Actinoplanacea-törzsnek a felhasználásával, nagy keményítőtartalmú tápoldatban lefolytatott fermentáció útján oly fermentleveket állíthatunk elő, amelyek 100 000— 110 000 amiláz-inhibitor egységet (a továbbiakban: AIE) tartalmaznak ml-enként. A találmány szerinti eljárásban felhasználásra kerülő SE 50/13 törzshöz úgy jutunk, hogy az SE 50 törzs kultúráját tápközeget tartalmazó agarlemezen szétterítjük vagy más módon eloszlatjuk, majd néhány napig inkubáltatjuk például 28 °C hőmérsékleten, ezután a képződött kolóniákat átoltjuk és külön-külön megvizsgáljuk amiláz-inhibitort termelő képességüket. Az így kiválasztható variánsok mennyiségét ismert módon növelhetjük, ha a kultúrát szétterítés előtt mutagen hatásoknak tesszük ki. Emellett azt tapasztaltuk, hogy az inhibitor-hatású anyag semleges, 5 és 8 közötti pH-értéknél közvetlenül adszorbeáltatható a fermentléből aktívszén felületére és erről azután vizes alkoholokkal vagy acetonnal, különösen savas, 1 és 3 közötti pH-értéken ismét deszorbeálható. Minthogy savas, 1 és 3 közötti pH-értékeknél az inhibitor-hatású anyag meglepő módon csak nyomokban adszorbeálódik, ezzel szemben a fermentle vet szeny-171217 1
