167605. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hordozóanyag előállítására fehérjék számára
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Bejelentés napja: 1973. V.18 Elsőbbsége: (GI-191) Svájc: 1972. VII. 12. -10422/72 Közzététel napja: 1975. VI. 28. Megjelent: 1978. X. 5. 167605 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/02 C 08 k 1/00 & ,..„.:, •' ^ .,. y Feltaláló(k): Krasnobajew Victor, biokémikus, Zolliketberg, Svájc Tulajdonos: L. Givaudan et Cie Société Anonyme, Genf, Svájc Eljárás hordozóanyag előállítására fehérjék számára 1 Találmányunk fehérjék számára szolgáló hordozóanyag előállítására vonatkozik. Azt találtuk, hogy vízben oldhatatlan fehérje-készítmények - különösen enzim-készítmények - készítésére felhasználható hordozóanyagokat oly módon állíthatunk elő, hogy valamely vízoldhatatlan polimert, vagy — előnyösen — valamely vízben oldhatatlan, szervetlen oxidot, hidroxidot vagy amidot aromás diaminnal kezelünk és a reakcióterméket diazotáljuk. Az eljárás során a hordozóanyag részecskéit aktív diazonium-csoportokat tartalmazó leoldhatatlan réteggel látjuk el. Az ily módon kapott hordozó a fehérje-oldattal való kezeléskor vízoldhatatlan fehérje-készítményeket szolgáltat. A találmányunk szerinti eljárással a hordozóanyag előállításánál szervetlen anyagként szilikátokat és szilikáttartalmú anyagokat, pl. homokot, köveket, szilikagélt vagy kovasavgélt, bentonitot, wollastonitot vagy üveget; továbbá fémoxidokat (pl. alumíniumoxidot és hidroxi-apatitot) alkalmazhatunk. Polimerként előnyösen poliamidokat és cellulózt, különösen gyapotot (pl. vatta alakjában) alkalmazhatunk. Aromás diaminként előnyösen 1,2-fenilén-diamint, 4,4, -diamino-difenü-metánt, benzidint és 4,4'-diamino-sztilbént alkalmazhatunk. A találmányunk szerinti hordozók előállításához alapjában bármely aromás diamin felhasználható. A találmányunk szerinti eljárás során a hordozóanyag előállításánál a kiindulási anyagként felhasznált részecskéket előbb az amin oldatával kezeljük, előnyösen enyhe melegítés közben. Az ily módon kapott 10 15 20 25 terméket ezután önmagában ismert módon diazotáljuk. A diazotálást pl. nitrittel és savval (pl. sósavvá vagy ecetsavval) célszerűen 0 C° és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten végezhetjük el. A fehérjének a hordozóhoz való rögzítésekor az utóbbit a fehérje oldatával kezeljük; a fehérje/hordozó súlyarány célszerűen kb. 1—50 mg/g. A kezelést célszerűen valamely puffer-oldatban (pl. foszfát-pufferben) 5-7,8 (előnyösen 7,5) pH-értéken hajthatjuk végre. A találmányunk szerint előállított hordozóanyagok előnyösen antigének, antitestek, inhibitorok (pl. tripszin-inhibitorok) és különösen enzimek rögzítésére alkalmazhatók. Találmányunk szerint pl. az alábbi enzimekből állíthatók elő oldhatatlan enzim-készítmények: naringináz, hesperidináz, 0-galaktozidáz, ßglükozidáz, tripszin, bromalin, ficin, papain, a-amiláz, amiloglükozidáz és ureáz. Eljárásunk további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa 1 g szilikagélt (kromatográfiás célokra szolgáló termék) 200 mg 4,4'-diamino-difenil-metán és 10 ml vízmentes benzol oldatához adunk. Az elegyet 5 percen át időnkénti rázogatás közben vízfürdőn (80 C ) a benzol teljes mennyiségének eltávolításáig mele-30 gítjük, majd szűrjük. A maradékot 20 ml jéghideg vízben felvesszük, keverés közben előbb 300 g nátri-167605
