167224. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bízben oldhatatlan penicillin-aciláz enzimkészítmény előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTABSASAO ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. VII. 20. (BE-1174) Nagy-Britannia elsőbbsége: 1972. VII. 22. (34 411/72) Közzététel napja: 1975. IV. 28. Mégjelent: 1976. VIII. 31. 167224 Nemzetközi osztályozás: C 08 g 37/38 C07g 7/00 , ';i-.-r

\\ •v Feltalálók: Savidge Thomas Adrian, vegyész, Featherstone Powell Lawson William, vegyész Warren Kenneth Brian, Worthing vegyész Nagy-Britannia Tulajdonos: Beecham Group Limited, Brentford, Nagy-Britannia Eljárás yízben oldhatatlan penicillin-aciláz enzimkészítmény előállítására A találmány tárgya eljárás vízben oldhatatlan enzimkészítmény előállítására, amelyet a penicillinek amidkötését megbontó aciláz enzimből állítunk elő. A penicülin-acüáz enzimeket alkalmazhatjuk a fermentáció útján nyert penicillinnek 6-amino-penicillánsavvá való átalakítására. Az enzimet olyan pH viszonyok között alkalmazzuk, ahol a dezacetilezés (vagy az amino-csoport felhasadása) végbemegy és 6-aminopenicillánsav keletkezik. A találmány tárgya közelebbről eljárás vízben oldhatatlan enzimkészítmény előállítására vizes oldatban térhálós poliakrilát vagy polimetakrilát gyantát Escherichia coliból nyert penicillin-acilázzal és glioxállal vagy glutáraldehiddel hozva össze. Az eljárást oly módon végezzük, hogy egy alifás diamint, célszerűen 2—10 szénatomos oe,co-diaminoalkánt alkalmazunk. 1961 óta alkalmaznak penicillin-acilázt (vagy dezacilázt) (1 111778 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírás), azonban a sejtmentes enzim felhasználása nehézségbe ütközött, minthogy az enzim a reakcióelegyből nehezen különíthető el, továbbá a sejtmentes, vízoldható enzimet nehezen lehet ismét felhasználni. Megkísérelték ezeket a nehézségeket oly módon megoldani (1 917 057 számú NSZK-beli nyilvánosságra hozatali irat) hogy az enzimet egy polimer anyaghoz kötik és ily módon biztosítják a vízoldékonyságát. 10 15 20 25 Megkísérelték továbbá, (2 143 062 számú NSZK-beli nyilvánosságrahozatal irat) hogy vízoldhatatlan penicillin-acilázt készítsenek oly módon, hogy az acilázt egy szubsztrátumon adszorbeáltalak, majd dialdehiddel keresztkötéseket létesítenek. Az eljárás során keresztkötések képződhetnek a polimer és az enzim között is. Ezekkel a megoldásokkal oldhatatlan enzimkészítményt állítanak elő, amelyeket ismételten fel lehet használni, azonban az ily módon előállított enzim nem biztosít megfelelő hozamot a 6-aminopenicillánsav előállítása során, továbbá az enzimkészítmények újrafelhasználhatósága sem bizonyult kielégítőnek. A találmány célja vízben oldhatatlan, tárolásra és szállításra alkalmas penicillin-aciláz enzim előállítása, amelyet ismételten fel lehet használni. A találmány célja továbbá, hogy az enzim alkalmazásával magas hozammal nagy tisztaságú 6-aminopenicillánsavat állítsunk elő. A találmány újdonsága abban áll, hogy az enzimkószítmény előállítását egy alifás diamin jelenlétében végezzük. A diamin jelenlétében végzett dezacilezés eredményességét a következő táblázat tünteti fel. A táblázatban szereplő dezacilezési szám jelzi azt, hogy az enzimkomplexet hányszor lehetett ismételten felhasználni regenerálás nélkül. Minél 30 többször lehet egy enzimkészítményt regenerálás 167224