166652. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(tien-2-IL-acetilamino)-3-acetoximetil-CEF- 3-ÉM-4-karbonsav enzimes előállítására

MAGYAR SZABADALMI 166652 NÉPKÖZTÁRSASÁG LEÍRÁS (^fe| Nemzetközi osztályozás: 1§P Bejelentés napja: 1973. VIII. 21. (TO—927) Japáni elsőbbsége: 1972. VIII. 22. (47—84280) C 07 d 99/24 C 12 d 13/10 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1974. XI. 28. Megjelent: 1976. XI. 30. Feltalálók: Fujii Tadashiro vegyész, Shibuya Yuzo vegyész, Ohito-cho, Shizuoka-ken, Japán Tulajdonos: Toyo Jozo Kabushiki Kaisha cég, Ohito-cho, Shizuoka-ken, Japán Eljárás 7-(tien-2-il-acetilamino)-3-acetoximetil-cef-3-ém-4--karbonsav enzimes előállítására i A találmány tárgya új eljárás 7-(tien-2-il-acetilamino)-3-acetoximetil-cef-3-ém-4-karbonsav — a továbbiakban „cefalotin" — előállítására 7-amino-3-acetoximetil-cef-3-ém-4-karbonsav — a továbbiakban „7-ACA" — enzimes acilezésével. A találmány értelmében úgy állí- 5 tunk elő cefalotint, hogy 7-ACA-t vizes közegben egy Bacillus nembe tartozó, a 7-ACA aminocsoportját acilező enzimet termelő mikroorganizmustörzsből származó acilező enzim jelenlétében tienilecetsavval vagy annak származékával reagáltatunk. Az acilező enzim alkalmaz- 10 ható fermentlé, enzimkivonat, szilárd enzimkészítmény, oldhatatlanná tett enzimkészítmény és hasonlók alakjában. A cefalotin eddig úgy készült, hogy 7-ACA-t tienilecetsavval acetileztek (982 252 és 1 206 626 számú nagy- 15 britanniai és 3 252 973 és 2 536 698 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) vagy a 7-ACA-t vizes acetonban nátriumhidrogénkarbonát jelenlétében tienilacetilkloriddal reagáltatták, és a kapott cefalotint kálium- vagy nátriumsója alakjában különítették el 20 (3 218 318 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). A technika állásához tartozik az is, hogy az 507 983 számú svájci szabadalmi leírás szerint 7-acilamino-3--acetoximetil-3-cefém-4-karbonsavak állíthatók elő a 25 megfelelő 7-amino-3-dezacetoxi-cef-3-ém-4-karbonsavészterekből és a 159 663 számú magyar szabadalmi leírás szerint N-szubsztituált-7-amino-3-dezacetoximetil-3-cefém-4-karbonsavak állíthatók elő a megfelelő laktonból. Ezeknek a korábbi módszereknek hátrányaik vannak. 30 A 7-ACA vegyi úton történő acetilezése például elkerülhetetlenül környezetszennyeződési problémákat, többek között levegőszennyezést, bűzt és vízszennyezést okoz. Azt tapasztaltuk, hogy ha cefalotinnak a 7-ACA acetilezésével végzett előállítására Bacillus megaterium B-400 NRRL B-5385 törzs által termelt enzimet használunk, akkor a bűz elkerülhető, és a szennyvízkezelés könnyen végrehajtható. A találmány tárgya tehát enzimes eljárás a kemoterápiailag értékes cefalotin 7-ACA-ból történő előállítására. A találmány szerinti eljárás iparilag előnyös cefalotinnak bűz és levegőszennyezés okozása nélküli gyártására. A találmány szerinti eljárás alkalmas cefalotin előállítására szilárd fázisú enzimkészítmény használatával. Kutatásaink folyamán olyan acilező enzimet termelő baktériumot kerestünk, amely képes a 7-ACA aminocsoportjába tienilecetsav-csoportot bevezetni, és azt találtuk, hogy egy Bacillus nembe tartozó mikroorganizmus erős acilező hatást gyakorol a 7-ACA aminocsoportjára, és ezáltal a 7-ACA-ból és tienilecetsavészterből csaknem kvantitatíve cefalotin keletkezik. A tienilacetil-csoportnak a 7-ACA egy aminocsoportjába történő bevitelére tienilecetsavat vagy ennek egy származékát használjuk. Ezek a származékok lehetnek például 2-tienilecetsav-metilészter, 2-tienilecetsav-etilészter és hasonlók. A találmány szerinti eljárásban használt, acilező enzimet termelő mikroorganizmus szerves vagy szervetlen 166652 1