166530. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antipepszin hatású pepsztrationok előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. III. 24. Japán elsőbbsége: 1971. III. 26. (17292/71) Közzététel napja: 1974. X. 28. Megjelent: 1976. VIII. 31. (ZA—343) 166530 Nemzetközi osztályozás: C 12 d 13/06 13/10 Feltalálók: Umezawa Hamao vegyész, Tokió, Miyano Tetsuji vegyész, Aichi-ken, Funaishi Kohtaro vegyész, Aichi-ken, Takeuchi Tomio vegyész, Tokió Aoyagi Takaaki vegyész, Kanagawa-ken, Japán Tulajdonos: Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai, Tokió, Japán Eljárás antipepszin hatású pepsztatinok előállítására i A találmány tárgya eljárás új pepsztatin-származékok előállítására pepsztatin-termelő mikroorganizmusok felhasználásával. Umezawa és munkatársai munkássága alapján ismeretes, hogy a pepsztatin gastroduodenalis ulcus ellen hatásosan alkalmazható szer. A pepsztatint 5 mikroorganizmusok termelik, pontosabban a Streptomyces testaceus ATCC 21469 Hamada és Okami és a Streptomyces argenteolus var. toyonakensis ATCC 21468. A pepsztatin N-acilezett izovaleriánsav N-terminálist és szabad karbonsav C-terminálist tartalmazó 10 pentapeptid. [J. Antibiotics, 23, 259—262 (1970), ibid., 23, 263—265 (1970)]. A pepsztatin előállítására pepsztatin-termelő törzset peptont vagy más nitrogénforrást tartalmazó tápközegben fermentálnak, majd a terméket extrakcióval elkülönítik és tisztítják. A 161 558 lajstrom- 15 számú magyar szabadalmi leírás által közölt eljárás szerint a pepsztatin fémsói, amidjai vagy észterei formájában is elkülöníthető. j A fenti törzsek fermentlevében található pepszin- 20 -inhibitorokat tanulmányozva azt találtuk, hogy a fermentlé két olyan antipepszin-hatású pepsztatin-származékot is tartalmaz, amely a szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás elemzés szerint a pepsztatintól különbözik. A termékek savas hidrolizátumának gázkro- 25 matográfiás analízise szerint a pepsztatin és az új peptidek zsírsavrésze különbözik egymástól. A „pepsztatin B"-nek nevezett egyik új pepsztatin metilészterét metanolos oldatból finom tűs kristályok formájában kristályosítottuk ki. 30 A termék olvadáspontja 254—255 C°, elemzési adatai: C% 60,4 N% 9,74 H% 9,38 Ez az elemi összetétel a C36 H 87 N 5 0 9 összetételnek felel meg. (C% 60,6, H% 9,40, N% 9,82). Az anyag optikai forgatóképessége, (a)^ = — 95,5° volt. (c — 0,5 ecetsav.) Az anyag a pepsztatinhoz hasonlóan Rydon—Smith reakcióban [Nature 169, (4309) 922 (1952)] kék elszíneződést adott, hidroxilamin-vasklorid reakcióban színe vörös volt. A pepsztatin B metilésztere közepesen oldódik dimetilformamidban, dimetilszulfoxidban és ecetsavban, gyengén oldódik vízben, kloroformban, benzolban, etilacetátban és éterben. Metanolban jobban oldódik, mint a pepsztatin-metilészter, amelynek oldhatósága 5—10 mg/ml. A pepsztatin B metilésztert 20%-os sósavval 16 órán keresztül 105 C°-on hidrolizáltuk, a hidrolizátumot éterrel extraháltuk, majd a fázisokat gázkromatográffal és kétdimenziós rétegkromatográfiás elemzéssel vizsgáltuk. Az éteres extraktumban n-kapronsavat találtunk. A vizes réteg valint és alanint tartalmazott 2; 1 arányban, továbbá 3-hidroxi-4-amino-6-metilheptánsavatmutattunk ki benne. A pepsztatin B tehát zsírsavként n-kapronsavat tartalmazó pepsztatin, szerkezete az (I) képletnek felel meg. A szilikagél abszorbensen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok szerint a pepsztatin B metilészterének Rf értéke 0,39, a pepsztatin metilészteréé 0,35. (Eluálószer: kloroform: metanol: ecetsav 95 : 4: 1, elő-166530 1
