166407. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fokozottan vízoldékony peptidamidok és azok származékainak előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1972. II. 22. (GO—1188) Közzététel napja: 1974. IX. 28. Megjelent: 1976. V. 31. 166407 Nemzetközi osztályozás: C 07 c 103/52 Feltalálók: Túrán András oki. vegyészmérnök, Fauszt Irén oki. vegyészmérnök, dr. Bajusz Sándor oki. tanár, Budapest Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás fokozottan vízoldékony peptidámidok és azok származékainak előállítására i A találmány tárgya új eljárás fokozottan vízoldékony peptidámidok és azok származékainak előállítására, az alkotó aminosavak egyenkénti vagy csoportos kapcsolása útján. Megfigyelésünk szerint a savamidcsoportot tartalma- 5 zó peptidek nagyfokú vízoldékonyságot mutatnak abban az esetben, ha a savamidcsoportot hordozó aminosav (aszparagin, glutamin, terminális aminosavamid) közvetlen környezetében egynél több szerin és/vagy treonin és/vagy glicin és/vagy prolin és/vagy egyéb 10 hidrofil oldalláncú aminosav (arginin, hisztidin) van. Az ilyen peptidek szintézisénél a köztitermékek vizes extrakción és diregáláson alapuló konvencionális tisztítása nem, vagy csak rossz hatásfokkal végezhető el. A savamidcsoportok védésére (elsősorban az asz- 15 paraginban és glutaminban (Weygand a 2,4-dimetoxi-benzil- és és 2,4,6-trimetoxi-benzilcsöportot [Ber., 101, 3642 (1968), König pedig a p,p'-dimetoxi-benzhidrilcsoportot (Ber., 103, 2041 (1970)] használta abból a célból, hogy a savamidcsoporton keresztül haladó mel- 20 lékreakciókat (pl. transzpeptidáció) elkerülje. Saját tapasztalataink és az irodalom tanúsága szerint a szabad savamidcsoportot tartalmazó peptidek a legtöbb esetben könnyen előállíthatók mellékreakciók nélkül, ha a szintézis köztitermékei az említett fokozott vízoldékonyságot 25 nem mutatják. Példaként szolgálhat a lazac tirokalcitonin [H. D. Niall és mtsai.: Proc. Nat. Acad. Sei. US 64, 111 (1969)] fragmenseinek szintézise. A Lys-Leu-Ser-G/n-Glu-Leu és His-Lys-Leu-G/n-Thr-Tyr-Pro aminosavrendszerű [a rövidítések megegyeznek a IUP AC 30 (CBN)J. Biol. Chem., 241, 527 (1966) javaslatával] Illő és 17—23 fragmens, valamint a Cys-Ser-^w-Leu aminosavsorrendű 1—4 fragmens a glutamin-, illetve aszparagin-tartalom ellenére jó hozammal előállíthatók a lépésenkénti peptidszintézis szabályai szerint például a Z-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OtBu)-Leu-NHNH2,

és a Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH és BOC-Cys(Acm)-Ser-Asn-Leu-NHNH2 szerkezetű védett peptidszármazékok formájában (a képletekben Z jelentése karbobenzoxi-, BOC jelentése terc-butiloxikarbonil-, OtBu jelentése terc-butoxi- és Acm jelentése acetamido-metil-csoport). Az 1—4 védett tetrapeptidhidrazidból készült azid és a H-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-OMe szerkezetű hexapeptidészter kapcsolásával előállítható BOC-Cys(Acm)-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-OMe szerkezetű dekapeptidészterben a savamidcsoportot tartalmazó aminosavrész (Asn) környezetében három hidroxi-aminosav (Ser, Ser, Thr) van. A védett peptidészter oldékonysági tulajdonságaival magyarázható, hogy csupán 46%-os hozammal lehet izolálni, és a megfelelő szabad C-terminálisú vegyületet tiszta állapotban egyszerű tisztítási módszerekkel nem is lehet elkülöníteni. A találmány célja olyan eljárás biztosítása, amely a fenti nehézségek kiküszöbölésével jó kitermeléssel teszi lehetővé fokozottan vízoldékony peptidámidok előállítását és a közti termékek konvencionális tisztítását. Azt találtuk, hogy az egyébként fokozott vízoldékonysággal rendelkező peptidámidok elvesztik hidrofil tu-166407 1