166074. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hordozóhoz kötött biológiailag aktív proteinek előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. VI. 08. (BO—1380) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1971. VI. 09. (P 21 28 743.4) Közzététel napja: 1974. VIII. 28. Megjelent: 1976. V. 31. 166074 Nemzetközi osztályozás: CD7 g 7/02 Feltalálók: Dr. Beaucamp Klaus vegyész, Tutzing, Dr. Bergmeyer Hans Ulrich vegyész, Tutzing, Botsch Karl-Heinz vegyésztechnikus, Bernried, Dr. Jaworeck Dieter vegyész, Tutzing, Dr. iNelboeck-Hochstetter Michael vegyész, Tutzing, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás hordozóhoz kötött biológiailag aktív proteinek előállítására í A találmány tárgya új eljárás hordozóhoz kötött biológiailag aktív proteinek előállítására. A hordozóhoz kötött proteinek, különösen a hordozóhoz kötött enzimek iránti érdeklődés állandóan nő és már számos hordozóanyagot, valamint rögzítési módszert (ismertettek. Az eddig ismert módszerek és hordozóanyagok közül azonban csak kevés eredményezett valóban kielégítő, nagy aktivitású és megfelelő stabilitású terméket, jó kitermelés mellett. Ennék következtében a kereskedelemben csak kevés hordozóhoz kötött enzim kapható, ezek túlnyomó része is a különösen stabil proteolitükus enzimek közé tartozik. Ez elsősorban arra vezethető vissza, hogy az érzékenyebb enzimek vagy enzámkomplexek laz Isimért módszerekkel végzett rögzítésnél teljesen elvesztik aktivitásúkat, vagy olyan instabillá válnak, hogy műszaki célokra nem alkalmazhatók. 1 A találmány feladata egy különösen kíméletes eljárás kidolgozása volt proteinek megkötésére oldhatatlan hordozón, amely olyan termékeket eredményez, amelyeknél nemcsak az aktivitás nagy és az aktivitás-hlasznosítáis jó, hanem elsősorban olyan stabilisak, hogy műszakilag alkalmazhatók. Csak az említett követelmények teljesítésével lehet az enzimatikusan aktív proteinek elvi tulajdonságát — nevezetesen, hogy nem használódnak el és hosszú ideig ismételten felhasználhatók — műszakilag hasznosítani. A feladatot a találmány szerint hordozóhoz kötött proteinek előállítására szolgáló olyan 5 eljárással oldjuk ímeg, amelyben a proteint vizes oldatban valamely, legalább egy expoxicsoportot és legalább egy további, á hordozóanyaggal kötés létesítésére alkalmas funkciós csoportot tartalmazó vegyülettel reagáltatjuk, 10 majd ezt a további funkciós csoportot a hordozóanyaghoz kapcsoljuk. A találmány szerinti eljárásnál a protein az expoxicsoportot tartalmazó vegyülettel kovalens kötést létesít az expoxicsoport hasadása köz-15 ben. Az így kapott közbenső terméket további elkülönítés nélkül kapcsoljuk a megfelelő hordozóhoz oly módon, hogy a további funkciós csoportot a hordozóanyaggal reagáltatjuk. További funkciós csoportként előnyösen olyan 20 csoportok jönnek számításba, amelyek addícióra vagy kondenzációra képesek a tulajdonképpeni hordozóanyaggal. Kondenzációm képes csoporttal rendelkező epoxivegyületek alkalmazásánál ügyelni kell arra, hogy a kondenzáoió-25 nál ne hasadjanak le olyan anyagok, amelyek a kötött protein aktivitását hátrányosan befolyásolják. A kötni kívánt proteinnel végzett néhány, egyszerű előkísérlettel mindig könnyen megállapítható, hogy egy bizonyos, kondenzá-30 cióra képes csoport esetében a lehasadás nem 166074
