163672. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens a kreatinin specifikus meghatározására - enzimes lebontás
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI L1ÍR AS A bejelentés napja 1972. V. 04. (BO-1370) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1971. V. 05. (P 21 22 255.9) Közzététel napja: 1973. V. 28. Megjelent: 1975. V. 31. 163672 Nemzetközi osztályozás: G 01 n 31/14; 31/22; 31/16 'eltalálok: )r. WAHLEFELD August vegyész, Weilheim, 4ÖLLERING Hans vegyésztechnikus, Tutzing, IERNT Erich gyógyszerész, München, )r. GRUBER Wolfgang vegyész, Garatshausen, )r. BERGMEYER Hans Ulrich vegyész, Tutzing, íémet Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás és reagens a Kreatinin specifikus meghatározására l A találmány a kreatinin specifikus enzimatikus neghatározásának egy új eljárásra és a meghatároásra szolgáló új reagensre vonatkozik. A klinikai kémiában, különösen a vese funkciós liagnosztikájában, a kreatinin meghatározása fon- 5 os szerepet játszik. A kreatinin meghatározása a zérumban, illetve az úgynevezett clearence-vizsgáatban, mely a szérumban és a vizeletben való egydejű meghatározást jelenti, a klinikai laboratóriimban a standard vizsgálati módszerek közé tartó- 10 ;ik. Az eddig ismert meghatározási módszerek a kreainin és a pikrinsav lúgos közegben való színreakcióán alapulnak, melyet M. Jaffé fedezett fel. (Z. >hysiol. Chem. 10, 391 (1886).) Ennél a módszernél 15 i minta fehérjetartalmának savas elbontása után, ÍZ történhet pl. triklórecetsavval vagy pikrinsavval), najd pikrinsav és nátronlúg hozzáadása után a felüliszóban színezó'dés keletkezik és ezt fotometriásan nérjük. Ennek az önmagában véve egyszerű eljá- 20 ásnak az a hátránya, hogy nem specifikus a kreatiíinra. (S. Narayaman, H. D. Appleton, Clin, Chem. '8, 27 (1972).) A Jaffé-reakció módosításai során a meghatáro:ás pontossága és kivitelezési formája javult ugyan, 25 izonban anélkül, hogy az említett alapvető' hiányoság megszűnt volna. A Jaffé-módszer igen érzékeny naradt a zavaró hatásokra és már a H+, ill. OH~ onkoncentrációban bekövetkező csekély eltérések s a színmélység megváltozásához vezetnek. (H. P. 30 Seelig, Z. Klin. Chem. u. Klin. Biochem. 7, 581 (1969)). Egy másik ismert módszer szerint a kreatinint metilguanidinben oldott o-nitrobenzaldehid hozzáadásával alakítják át, melyet ezután a Sakaguchireakcióval határoznak meg. (F. v. Pilsum, M. Boris, Clin. Chem. 3, 90 (1957)). Továbbá leírtak egy eljárást a kreatinin és a kálium-higany-tiocianát közti színreakció alapján is. (P. Stelgeus, Biochem. Z. 324, 227 (1953)). Mindkét módszer azonban a klinikai laboratórium számára alkalmatlannak bizonyult. Rubos és Miller (J. Biol. Chem. 121, 457 (1937)) a Jaffé-reakció módosítását írták le, melyben egy meghatározott baktérium nyersextraktumával egy minta alikvot részében a kreatinint lebontották, mialatt a próba másik része változatlanul maradt. Ezután mindkét mintarészletben elvégezték a Jafféféle meghatározást és az extinkciós értékek különbségéből meghatározták a kreatinin-tartalmat. Ez a módszer ugyan nagyon specifikus, a meghatározás azonban meglehetősen körülményes és a baktérium folyamatos tenyésztését igényli. Ezért igény mutatkozott egy egyszerű, de specifikus kreatinin meghatározására. A jelen találmány megoldja ezt a problémát a kreatinin specifikus meghatározására szolgáló eljárás útján, mely abban áll, hogy egy vizes kreatinin-tartalmú oldatot 7,5—9 közötti pH-értéken (kreatininamidohidrolázzal) inkubálunk és/vagy a kép[63672 1
