163661. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kallikrein-tripszin-inhibitor izolálására szarvasmarha szerveiből
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS A bejelentés napja: 1972. III. 31. BA—2722 Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1971. IV. 3. (P21 16 377.9) Közzététel napja: 1973. V. 28. Megjelent: 1975. V. 31. 163661 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/026 Feltalálók : Dr. RAUENBUSCH Erich vegyész, Dr. GÖLKER Christian vegyész, WUPPERTAL-Elberfeld, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Bayer AG., Leverkusen, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás kallikrein-tripszin-inhihítor izolálására szarvasmarha szerveiből l A szarvasmarha szerveiből izolált kallikrein-tripszin^inhibitor (Trasylol R) 6500 molekulasúlyú bázikus polipeptid, melynek kémiai szerkezetét már bizonyították. [F. A. ANDERER és S. HÖRNLE: Z. Naturforsch, pt. b. 20, 457, 01585—1174/403 5 (1965); F.A. ANDERER: Z. Naturforsch, pt. b. 20, 462 (1965); F. A. ANDERER és S. HÖRNLE: J. Biolog. Chem. 241, 1568 (1965)]. A kallikrein-tripszin-inhibitor gátolja a különböző proteázokat, melyek közül a fontosabbak a következők: kallikrein, 10 tripszin, kimotripszin és a plazmin. Az inhibitor különösen injekciós-készítmények formájában kerül a gyógyászatban nagymértékben felhasználásra. [R. GROSS és G. KRONEBERG: „Neue Aspekte der Trasylol-Therapie", F. K. Schattauer Verlag, Stutt- 15 gart (1965).] Az anyagtól erre a célra természetesen nagymértékű tisztaságot követelnek meg. A tisztasági fok elérésére eddig a nyers kivonatot több lépcsőben, specifikus kicsapó-reagensekkel tisztították, mint 20 amilyenek a szulfoszalicilsav, metafoszforsav, triklórecetsav, és végül kristályosították [lásd 954 284, 1084 433, 1 155 563, 1 181371, 1 193 200 számú NSZK-beli szabadalmi leírások, továbbá F. SCHULTZ: Naturwiss. 54, 338 (1967)]. Az egyes 25 lépcsők között több alkalommal sómentesítés szükséges, melyet ioncserélőkkel folytatnak le. E sómentesítés leegyszerűsítésére és ezzel egyidőben a kivonat töményítésének elérésére vizsgáltuk meg Gustafson [R. L. GUSTAFSON (Röhm & Haas Co., 30 Philadelphia), 1 274 128 sz. NSZK-beli szabadalmi leírás.], valamint H. W. BLESSING és P. LaRoche de BENNEVILLE [(Röhm & Haas Co., Philadelphia), 2 040 107 számú közrebocsátott NSZK-beli szabadalmi bejelentés] eljárását, melyek a szerves anyagok hidrofób anyagokkal, mint amilyenek a nedvesítőszerek, epesavak, tripszin, polipeptid és egyebek, vizes oldatból pórusos polisztirolgyantán való elkülönítését írják le. Javasoltak már olyan tisztítási módot is, amely szerint valamely, a tisztítandó inhibitor által gátolt enzimet kovalens kötéssel egy nagymolekulájú hordozón kötnek meg és az így kapott adduktot biospecifikus adszorbensként alkalmazzák az inhibitornak az affinitás-kromatográfia elve alapján történő tisztítására, és dúsítására (157 648 számú magyar szabadalmi leírás). A jelen találmány szerint egy ennél sokkal egyszerűbben kivitelezhető, és csupán egy már készen rendelkezésre álló különleges minőségű szintetikus hidrofób gyanta adszorbensként való alkalmazását igénylő eljárást alkalmazunk a kallikrein-tripszin-inhibitor igen jó hatásfokkal történő tisztítására. Meglepő módon azt találtuk, hogy szarvasmarha-szervek nyers kivonatából, mint amilyen például a tüdő, amely nagyszámú polipeptidet és más sejtszerkezetű anyagot tartalmaz, a kallikrein-tripszin-inhibitor nagy belső felülettel rendelkező porózus polisztirolgyantán nemcsak hogy adszorbeálható, hanem ezt követően messzemenően szelektív módon eluálható. Ezzel egy lépésben nemcsak a 163661 1
