163492. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kreatinin-amidohidroláz előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. V. 4. (BO—1368) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1971. V. 5. (P 21 22 294.6) Közzététel napja: 1973. IV. 28. Megjelent: 1975. VI. 30. 163492 Nemzetközi osztályózfe: C 12 d 13/10 c 07 g ifm Feltalálók: Dr. Holz Günter vegyész, Gramsall Johanna, laboráns, Dr. Nelboeck-Hochstetter Michael vegyész, Dr. Bergmeyer Hans Ulrich vegyész, egyetemi tanár, Tutzing/Obb, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: BOEHRINGERMANNHEIMGmbH7 Mannheim-Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás kreatinin-amidohidroláz előállítására í A találmány tárgya eljárás a kreatinin-amidohidroláz és adott esetben kreatin-amidinohidröláz enzimek előállítására mikroorganizmusokból. A klinikai kémiában, különösen a veseműködés diagnosztikáját illetően fontos szerepet játszik a fehérje- 5 anyagcsere közbenső és végtermékeinek meghatározása. Ezekhez tartozik a kreatinin és a kreatin is. A kreatinin meghatározását eddig már többször ismertették; az ismert módszerek többsége a nem-enzimatikus JaSereakción alapul, amelynek az a hátránya, hogy nem 10 specifikus. Ismertettek továbbá egy specifikus mikrobiológiai meghatározási módszert is, izolált baktériumokkal, amely módszernél mosott sejt-szuszpenziókat alkalmaznak a kreatinin mérésére és a karbamid- valamint az 15 ammónia-képződést használjak fel az enzimhatás mértékének megállapítására. Oldható, a kreatinin le* bontására alkalmas enzimextraktot azonban nem sikerült ily módon kapni. Az enzimek segítségévei törtette specifikus kreatmin-meghatározás kidolgozásának fel- 20 tétele az volt, hogy olyan alkalmas, oldható enzimeket találjanak, amelyek specifikusak és a kreatinin mérhető átalakulását katalizálni képesek. Roch, Lacombe és Girard (BBA 6, 210, 1950) két Pseudomonas-fajtában a kreatinázt, a kreatininázt és 25 egy glükociaminázt olyan specifikus enzimként jellemezték, amelyek szubsztrátumaikból a guanidino-csoportból karbamidot tesznek szabaddá* Továbbá Akamatsa és munkatársai (Enzymologia, 15, 122, 158, 173. o., 1951.) talajból izolált baktériumokban egy kreatin* 30 mutáznak jelölt enzimet találtak, amely a kreatátín és a kreatin közötti egyensúly beállására gyakorol hatást. A kreatinin feltételezett lebontási folyamata a következő: KjeatimiKskreatin— karbamid és szarkozin—glicin—ammóniái Jelen találmányunk olyan mikroorganizmusok alkalmazására vonatkozik, amelyek különösen alkalmasak kiindulási anyagként a kreatinm-amidohidröláz és kreatinamidinohidroláz enzimek kinyerésére. Már többször megkísérelték, hogy a kreatinint mikroorganizmusok segítségével enzimatíkusan lebontsák, eddig azonban nem sikerült olyan vízoldható enzimextraktokat kapni, amelyek a kreatinint kielégítő mennyi* ségbe» képesek lebontom. Ilyen kísérteteket végeztek például Corynebactermm-okkal, Pseudomonas aeruginosa-val, Pseudomonas ovalis-szal, Pseudomonas eissenbergü-velésClostridkim-okkal. A találmány rélkitfeése az volt»i hogy olyan mikroorganÉmUsokat találjunk és tenyésszünk, amelyek a két fent említett enzim kinyerésére alkalmas vízoldható feltárási frakciót szolgáltatnak. A találmány célkitűzéseit oly módon valósítottuk meg, hogy a kreatinin-amidohidroláz és kreatin-amidonohidroláz előállitására Alcaligenes spec. WS 51400 vagy Penicillium WS 90 001 mikroorganizmusokat alkalmaztunk. Az Alcaügeoés spee; WS 51400 a következő tulajdonságokkál rendelkezik: határozottan oxidatív, Gramnegatív, rövid pálcikák» A csirák gyengén oxidáz-pozití-163492 1
