163273. lajstromszámú szabadalom • Eljárás urokináz-koncentrátumok előállítására emlősök vizeletéből

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1971. IX. 17. (GO—1169) Közzététel napja: 1973. TI. 28. Megjelent: 1975. II. 28. 163273 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/02,/7/026 Feltalálók: Dr. Bagdy Dániel orvos, 40% B. Barabás Éva vegyész, 20% Bereczky Zsuzsa vegyészmérnök, 15% Gere Pál vegyész, 15% H. Farkas Judit asszisztens, 10% Budapest Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás urokináz-koncentrátumok előállítására emlősök vizeletéből í A találmány tárgya eljárás urokináz-koncentrátumok előállítására emlősök vizeletéből. Közismert tény, hogy a szív- és érrendszeri betegségek elterjedtsége és halálozási arányszáma statisztikai adatok szerint világszerte az első helyen áll. Köztudott 5 az is, hogy e betegségek jelentős hányada vérrögképződéssel jár együtt. Trombózisban a keringés útját elzáró vérrög közvetlen életveszélyt is okozhat. A vérrög feloldása — a tudomány mai állása szerint — legcélszerűbben kináz-típusú enzimkészítményekkel valósít- 10 ható meg, amelyek aktiválják a vérplazmában inaktív formában keringő yérrög-oldó enzimet, a plazminogént (profibrinolizint). Az urokináz, a plazminogén egyik természetes eredetű aktivátora a vizelettel választódikki. Az urokináz előállítására számos eljárás ismeretes. 15 Ezek közül egyesek a plazminogén aktivátorát kicsapással, mások adszorpciós úton különítik el a vizeletből. A kicsapásos eljárások közül a kezdetben alkalmazott etilalkoholos módszer lúgos közegben [Astrup T. és Stemdorff I.: Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 81, 765 (1952)] 20 és savanyú közegben [Guest M., Monier S. R. és Celander D. R.: Transactions 19th Internat. Congr. Physiol. Montreal p. 422 (1953)] egyaránt kedvezőtlen eredményeket adott. Singher H. O. és Zuckerman L. egyik eljárásukban (2 961 382 sz. USA-beli szabadalmi 25 leírás) cinkacetátos kicsapást alkalmaztak. Dóczi J. foszforilált cukor jelenlétében kinin vagy sztrichninalkaloidok vízoldékony sójával savanyú közegben csapta ki a vizeletből az urokinázt. Nathan H. Sloan (3 477 910, 3 477 911 és 3 477 913 sz. USA-beli 30 szabadalmi leírások) csersavat használt kicsapásra, és az urokinázt nukleoproteintannát komplex alakjában különítette el a vizeletből. Jóllehet ez utóbbi módszer elvileg kedvező megoldási lehetőséget képvisel, ipari technológiai szempontból — hasonlóan a cinkacetátos kicsapási eljáráshoz — sok kívánnivalót hagy maga után. Az adszorpciós eljárások soiában v. Kaulla [J. Lab. Clin. Med. 44,944 (1954)], továbbá Nobuo Aoki és Toshio Asada [3 542 646 sz. USA-beli szabadalmi leírás] báriumszulfáton, Ploug és Kjelgaard [Biochim. Biophys. Acta 24, 279 (1957) és 2 983 647 sz. USA-beli szabadalmi leírás] szilikagélen kötik meg az urokinázt. Báriumszulfáton az urokinázzal együtt adszorbeálódik a vizeletben megtalálható véralvadást gyorsító faktor is, amely a hemofiliás vér alvadását normalizálni képes. A szervetlen adszorbensek közül leírták még bizonyos fémhidroxidok (alumíniumhidroxid, cinkhidroxid), továbbá a kalciumfoszfát (3 355 361 sz. USA-beli szabadalmi leírás), valamint egyéb szilíkátféleségek, így a bentonit (3 335 361 sz. USA-beli szabadalmi leírás) és a Hyflo-Supercel alkalmazhatóságát [Bergstrom K.: Arkiv Kemi 21, 535 (1963)]. A szerves adszorbensek közül több eljárás használ benzoesavat az urokináz elkülönítésére vizeletből, így Anderson és mtsai [Biochem. J. 59, 638 (1955)], Kickhöfen és mtsai [Biochem. Z. 330,467 (1958)], továbbá Singher és mtsai (2 989 440 sz. USA-beli szabadalmi leírás). Foszfátcellulózt alkalmaz a 3 468 760 sz. USA-beli szabadalmi leírás, szulfometilceílulózt a 472 436. sz. svájci szabadalmi leírás 163273 1